СПОСОБ СНИЖЕНИЯ МАССЫ ТЕЛА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ

Название	СПОСОБ СНИЖЕНИЯ МАССЫ ТЕЛА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ
Разработчик (Авторы)	Исаев В.А., Тутельян В.А., Ашмарин И.П., Мясоедов Н.Ф., Самонина Г.Е., Андреева Л.А., Ляпина Л.А.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2262945
Дата регистрации	29.04.2004
Правообладатель	Закрытое Акционерное Общество "Научно-производственное предприятие "Тринита"

Описание изобретения

Изобретение относится к фармакологии, биохимии и может быть использовано для подавления аппетита, уменьшения количества потребляемой пищи и снижения массы тела у животных и основано на применении простейших пролинсодержащих пептидов, являющихся дериватами хорошо известных эндогенных пептидов и пищевых белков.

В настоящее время избыточный вес и ожирение - один из основных факторов, способствующих появлению сердечно-сосудистых заболеваний у взрослого населения. Многочисленные исследования, проведенные и опубликованные за последнее время, показали, что помимо всего прочего, риск смертности при сердечно-сосудистых заболеваниях и других патологиях возрастает прямо пропорционально увеличению веса (показатель BMI). Лечение от избытка веса требует значительных затрат и зачастую приводит к потере трудоспособности. Поэтому чрезвычайно важно с точки зрения здоровья, нормального самочувствия, эстетической привлекательности попытаться исправить и убрать избыточный вес. Было показано, что уменьшение веса на 15% может вызвать положительные изменения состояния здоровья.

Стратегия по приведению организма к нормальным или приемлемым весовым показателям должна предусматривать уменьшение калорий и увеличение физической нагрузки, однако осуществить это на практике достаточно сложно без использования дополнительной, медикаментозной или иной помощи.

Известен способ коррекции веса человека путем психотерапевтической установки на снижение аппетита с использованием одновременно лечебно-диетического питания и повышенным контролем за приемом пищи. Указанное лечение рекомендуется проводить только в условиях стационара, что не всегда приемлемо для индивидуума (заявка РФ №99114939, А 61 М 21/00, 1999.07.07, опубл. 2001.05.10).

В заявке РФ №94039527 (A 61 N 5/06, 1994.10.20, опубл. 1997.02.27) отмечается, что снижение веса можно проводить по достаточно простой схеме и в короткие сроки путем воздействия красного и зеленого цвета на центральное зрение и оранжевого - на периферийное, развивая комбинаторную деятельность по созданию зрительных образов, положительно действующих на гомеостаз человека, снижая аппетит.

Широко используется для снижения веса лечебное голодание в различных его вариантах, касающихся диеты и приема жидкости, однако его рекомендуется проводить только в условиях стационара (патент РФ №2005491, А 61 К 35/78, 1991.06.14, опубл. 1994.01.15).

Чувства голода и насыщения регулируются центрами головного мозга, в первую очередь центрами гипоталамической области. В некоторых патологических состояниях, сопровождающихся ожирением, избыточной массой тела, целесообразно использовать в комплексной терапии лекарственные средства, ограничивающие аппетит (анорексигенные средства).

В настоящее время находят применение в качестве анорексигенных средств некоторые синтетические соединения негормональной природы, например фенамин. Лечение последним производят в сочетании с малокалорийной диетой, при необходимости с разгрузочными днями. Назначают внутрь в виде таблеток (25 мг) 2-3 раза в день. Курс лечения - 1,5-2,5 месяца. При необходимости назначают повторный курс через 3 месяца (М.Д.Машковский. Лекарственные средства, М.: Медицина, 1994, т.II, стр.243).

Известно также использование для лечения ожирения и состояний, ассоциирующих с ним, производных 1,5-бензодиазепина, а также их солей и сольватов, путем введения терапевтически эффективного количества, в результате чего достигается аноректический эффект, происходит регуляция аппетита, вызывается чувство насыщения (WO 94/24149, GB, опубл. 27.10.94, патент РФ 2135486, C 07 D 243/12, опубл. 27.08.99).

В опубликованной 1999.07.20 заявке РФ №97113700, А 61 К 31/40 (DK №96/00011, 10.01.96, опубл. 1999.07.20 описывается применение 3,4-дифенилхроманов в композиции с фармацевтически приемлемым носителем для лечения и профилактики ожирения.

Однако химические препараты, как правило, вызывают побочные реакции организма, такие как появление раздражительности, бессонница, сухость во рту, тошнота, аллергия, задержка жидкости в организме и др. При назначении препаратов лицам с заболеванием сердечно-сосудистой системы и при гипертериозе необходима осторожность. Фепранол, в частности, оказывает возбуждающее влияние на центральную нервную систему, что далеко не всегда позитивно для человека. Кроме того, применение медикаментозного лечения все равно требует комплексной терапии в сочетании с низкокалорийной диетой и/или разгрузочными днями.

Учитывая недостатки применения химических препаратов для снижения веса и подавления аппетита, в последние годы ведется поиск аналогичных средств среди соединений эндогенной природы, в частности белков.

Высокомолекулярные белки против ожирения предложены в патентах РФ №97121100, А 61 К 38/16, опубл. 1999.08.27 и №97114945, А 61 К 38/00, опубл. 1999, 07, 20 (страна приоритета - US).

Пептид, включающий аналог карбоксиконцевой последовательности гормона роста, где карбоксиконцевая последовательность содержит остатки 177-191 человеческого гормона роста:

Leu-Arg-Iie-VaI-Gin-Cys-Arg-Ser-VaI-GIy-GIy-Ser-Cys-Giy-Phe, или последовательность гормона роста отличного от человека млекопитающего, в сочетании с фармацевтически приемлемым наполнителем и/или разбавителем, предлагается для лечения ожирения у человека (WO 99/12969 (AU), опубл. 1999.18.03, РФ №2000109265, С 07 К 14/61, опубл. 2002.03.10).

Согласно патенту РФ №96109211 (С 07 К 14/47, опубл. 1998.10.27) (страна приоритета - US) предлагается гомогенный или рекомбинантный биологически активный человеческий или мышиный протеин ожирения, содержащий последовательность: SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:3 или его фрагмент, обладающий активностью указанного протеина, или конъюгаты полиэтиленгликоля и/или полипропиленгликоля, связанных с указанным протеином, со средней молекулярной массой от 15 кДа до 60 кДа, для снижения потребления пищи у млекопитающих и снижения скорости прибавления их веса, лечения, предотвращения и регулирования ожирения и связанных с ним болезней.

В патенте РФ №2197261, А 61 К 38/16, 2003, 27.01 (РСТ/ДК 97/00086, 1997, 27.02., PCT/WO 97/31943, 1997, 04.09), взятом за прототип, предлагается использование фармацевтической композиции, содержащей пептид, для подавления аппетита или индукции насыщения у индивидуума, а также для профилактики и лечения болезней или нарушений, связанных с нарушенной регуляцией аппетита. В качестве упомянутого пептида используют подобный глюкагону пептид, названный GLP-2, выделяемый из кишечных L-клеток, со следующей аминокислотной последовательностью:

HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD (GLP-2-человека)

HADGSFSDEMNTILDNLATRDFINWLIQTKITD (GLP-2-крысиный)

HADGSFSDEMNTVLDNLATRDFINWLLHTKITD (GLP-2-свиной)

Пептид GLP-2 или его гомолог можно получить техникой рекомбининтных ДНК в соответствии с методикой, широко известной в этой области, в частности ДНК- последовательность, кодирующую пептид GLP-2, можно выделить или синтезировать на основе опубликованной ДНК-последовательности препроглюкагона человека.

Способ подавления аппетита осуществляют путем инъекции раствора фармацевтической композиции на основе указанного пептида в количестве 5-10 мкг/кг веса тела. Введение препарата подавляло потребление пищи на 24-32%.

Недостатками использования указанных пептидов и композиций на их основе являются:

- сложность получения, выделения, очистки используемых пептидов, поскольку, как правило, требуется или осмотическое разделение, или высокоэффективная жидкостная хроматография, гель-фильтрация и т.д.,

- опасность возникновения побочных эффектов, в том числе гормональных, учитывая родство указанных пептидов с гормонами.

Задачей настоящего изобретения является обеспечение возможности снижения количества потребляемой пищи с одновременным устранением побочных реакций в процессе подавления аппетита и снижения массы тела.

Поставленная задача достигается тем, что в способе снижения массы тела в эксперименте на опытных животных, включающем введение последним эффективного количества вещества на основе пептида, в качестве указанного вещества используют глипролиновый пептид, представляющий собой трипептид Pro-Gly-Pro или глипролинсодержащий пищевой белок, представляющий собой желатину.

Предпочтительно использовать трипептид Pro-Gly-Pro в виде инъекций в количестве 0,09-1,0 мг/кг массы тела, а глипролинсодержащий пищевой белок в виде добавки к пище в дозе 8-10:1 (мас.ч.) соответственно.

Способ осуществляют следующим образом на примере глипролинового пептида, представляющего собой трипептид Pro-Gly-Pro, не ограничивая при этом использование других глипролинов - Pro-Gly и Gly-Pro, и глипролинсодержащего пищевого белка, представляющего собой желатину в эксперименте на опытных животных.

Определенные количества глипролина Pro-Gly-Pro постоянно присутствуют в живом организме, образуясь в результате деградации ряда более крупных пептидов и белков, что позволяет рассматривать этот пептид как эндогенное соединение, не имеющее серьезных отрицательных побочных эффектов. Известно, что глипролин Pro-Gly-Pro обладает противоязвенными и антитромболитическими свойствами.

Глипролин Pro-Gly-Pro или пищевой белок - желатину, содержащую в большом количестве глипролин Pro-Gly-Pro и его метаболиты Pro-Gly и Gly-Pro, вводят белым беспородным крысам ежедневно в течение 4-14 дней. Желатина используется в качестве добавки к пище. Крысы контрольной группы получают размягченный в воде сухой комбикорм и воду без ограничения, а животные опытных крыс - тот же корм с добавкой в виде желатины в соотношении 9:1 и воду без ограничения, глипролин Pro-Gly-Pro, растворенный в физиологическом растворе, внутрибрюшинно вводят ежедневно в дозе 0.09-1.0 мг/кг массы. Контрольным животным внутрибрюшинно в те же сроки вводят такие же объемы физиологического раствора. В конце эксперимента определяют изменение веса тела на 100 г массы в день или количество потребленной пищи.

В работе использовали глипролин Pro-Gly-Pro, синтезированный в лаборатории регуляторных пептидов Института Молекулярной генетики РАН (Москва) классическими методами синтеза в растворе с применением смешанных ангидридов.

В качестве добавки к пище применяли желатин фирмы ICN Biomedical Inc (Ohio, USA), или российский желатин в составе которых 86-90% белка.

Результаты исследований обработаны с помощью прикладных программ Statistica 5.0 для Windows при использовании LSD теста. Различия считались значимыми при Р<0.05.

На фиг.1 показано влияние глипролина Pro-Gly-Pro на изменение веса тела крыс, получавших глипролин Pro-Gly-Pro (1 мг/кг) ежедневно в течение 5 дней.

На фиг.1 видно, что у контрольных животных увеличение массы тела на 100 г массы в день к 6-му дню составила 1.88 г, а у животных, получавших внутрибрюшинное введение глипролина Pro-Gly-Pro в дозе 1 мг/кг ежедневно в течение 5-ти дней - 0.99 г. Это различие достоверно. Крысы, получавшие глипролин Pro-Gly-Pro, прибавляли в среднем ежедневно на 0.89 г меньше в расчете на 100 г массы.

Сходные результаты получены и при скармливании крысам желатины как добавки к пище, обогащенной Pro-Gly-Pro и его метаболитами.

Фиг.2 иллюстрирует, что у контрольных животных увеличение веса тела на 100 г массы в день за 6 дней составило 2,5 г, а у животных, получавших добавку 4,5 г в течение 6-ти дней.

Еще большее различие выявлено при более длительном получении добавки к пище в количестве 4 г в течение 10 дней.

На фиг.3 представлены результаты экспериментов с 10-дневным скармливанием добавки. Контрольные крысы этой группы прибавили по 3,5 г/100 г массы/день, а крысы получавшие добавку к пище прибавили значительно меньше - 1,95 г/100 г массы/день, т.е. опытные крысы прибавляли в день на 1,5 г меньше, чем контрольные.

Фиг.4 иллюстрирует изменение прибавления веса контрольных и опытных крыс после 14-дневного эксперимента. Прибавление веса у контрольных крыс в среднем составило 2,31 г/100 г/день. Крысы, получавшие добавку к пище в течение 14-ти дней по 3,75 г, прибавили в массе 1,06 г/100 г массы/день, т.е. увеличение их веса было меньше на 1,25 г/100 г/день.

Уменьшение возрастания массы тела крыс при получении пищевой добавки может быть связано с несколькими причинами, в числе которых может быть и анорексия, т.е. меньшее потребление пищи. Оказалось, что 5-дневное внутрибрюшинное введение глипролина Pro-Gly-Pro в дозе 1 мг/кг в день приводило к меньшему потреблению пищи у этих крыс по сравнению с контрольными, которые получали внутрибрюшинное введение физиологического раствора. Крысы, не получавшие глипролин Pro-Gly-Pro, в среднем ежедневно поглощали 13.9 г/100 г массы тела. Животные, получавшие глипролин Pro-Gly-Pro в течение 5-ти дней, съедали в среднем только 9.2 г/100 г массы тела (фиг.5).

Из приведенных примеров видно, что предлагаемый принципиально новый физиологический препарат глипролин Рго-Gly-Pro и добавка к пище, содержащая его, весьма эффективны. Основываясь на экспериментальном материале, можно сказать, что аналогичные глипролину Рго-Gly-Pro глипролиновые пептиды будут оказывать подобный эффект снижения количества потребляемой пищи и снижения массы тела. Эффект уменьшения прибавления веса тела составляет от 47,0% за 5 дней до 78,0% за 14 дней приема глипролина. Преимуществом этих препаратов и содержащего глипролин Pro-Gly-Pro добавки к пище перед многими другими известными средствами снижения массы тела также состоит в заведомой физиологичности их состава и происхождения, исключающих побочные реакции.

Формула изобретения

1. Способ снижения массы тела в эксперименте на опытных животных, включающий введение последним эффективного количества вещества на основе пептида, отличающийся тем, что в качестве указанного вещества используют глипролиновый пептид, представляющий собой трипептид Pro-Gly-Pro или глипролинсодержащий пищевой белок, представляющий собой желатину.

2. Способ снижения массы тела в эксперименте на опытных животных по п.1, отличающийся тем, что трипептид Pro-Gly-Pro используют в виде инъекций в количестве 0,09-1,0 мг/кг массы тела.

3. Способ снижения массы тела в эксперименте на опытных животных по п.1, отличающийся тем, что глипролинсодержащий пищевой белок используют в виде добавки к пище в дозе 8-10:1 мас.ч. соответственно.

Изобретение "СПОСОБ СНИЖЕНИЯ МАССЫ ТЕЛА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ" (Исаев В.А., Тутельян В.А., Ашмарин И.П., Мясоедов Н.Ф., Самонина Г.Е., Андреева Л.А., Ляпина Л.А. ) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога