ШТАММ ВИРУСА ГРИППА В/60/Джилин/03/1 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ

Название	ШТАММ ВИРУСА ГРИППА В/60/Джилин/03/1 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ
Разработчик (Авторы)	Руденко Лариса Георгиевна, Александрова Галина Ибрагимовна, Ларионова Наталья Валентиновна, Климов Александр Иванович
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2307161
Дата регистрации	09.11.2005
Правообладатель	ГУ "Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" РАМН
Медаль имени А.Нобеля

Описание изобретения

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди взрослых и детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма В/60/Джилин/03/1.

Известный вакцинный штамм вируса гриппа - В/60/Иоханнесбург/99/50 - прототип [Патент №2215786, гос. рег. 10.11.2003, Бюл. №3. Штамм вируса гриппа В/60/Иоханнесбург/99/50 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей] утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом вируса гриппа, аналогичного вирусу В/Джилин/20/03.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса В/Джилин/20/03.

Вакцинный штамм В/60/Джилин/03/1 получен методом генетической реассортации эпидемического вируса В/Джилин/20/03 с холодоадаптированным штаммом В/СССР/60/69 - донором аттенуации - с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу В/СССР/60/69. Донор аттенуации - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа В/СССР/60/69, разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин [Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. СПб.: Наука. - 1994 - 151 с.].

Вакцинный штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при температуре инкубации 32°С и 37°С составляет 7,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при температуре инкубации 32°С и 25°С равна 3,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Определение состава генома вакцинного штамма проводили методом сравнительного анализа электрофоретической подвижности одноцепочечных фрагментов РНК родительских вирусов и реассортантного клона в 2,8%-ном полиакриламидном геле (Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир. - 1982 - 446 с.) в присутствии 4,5 М мочевины. Вертикальный электрофорез проводили в течение 20 часов при +4°С при постоянном напряжения 100 V. Установлено, что вакцинный штамм В/60/Джилин/03/1 унаследовал шесть генов, кодирующих внутренние негликозилированные белки (РВ1, РВ2, PA, NP, М, NS), от донора аттенуации и два гена, кодирующих поверхностные белки НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу), от эпидемического вируса В/Джилин/20/03. Принадлежность гена, кодирующего поверхностный белок НА, эпидемически актуальному вирусу В/Джилин/20/03 была также подтверждена в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с 1% взвесью эритроцитов кур.

Результаты анализа состава генома вакцинного штамма В/60/Джилин/03/1 представлены в табл.1 и на чертеже, где в качестве примера схематически представлен электрофорез одноцепочечных РНК в 2,8%-ном полиакриламидном геле в присутствии 4,5 М мочевины. 1-я дорожка - эпидемический вирус гриппа В/Джилин/20/03; 2-я дорожка - реассортантный вакцинный штамм В/60/Джилин/03/1; 3-я дорожка - донор аттенуации В/СССР/60/69.

Таким образом, представленный вакцинный штамм В/60/Джилин/03/1 характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса В/Джилин/20/03, структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Штамм депонирован в коллекции Государственного института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов имени Л.А.Тарасевича под №143.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА

Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32-33°С в течение 72 часов - 7,5 lg ЭИД₆₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Характеристики вакцинного штамма В/60/Джилин/03/1 представлены в прилагаемом паспорте. На основании их штамм использовали в приготовлении вакцины и проверили вакцину на волонтерах.

ПАСПОРТ ШТАММА

1. Название штамма - В/60/Джилин/03/1

2. Серия - серия 1

3. Метод получения - реассортация; характеристика родительских вирусов:

а) эпидемический вирус - В/Джилин/20/03

б) донор аттенуации - В/СССР/60/69

4. Количество пассажей - 6 в процессе реассортации

5. Характеристика штамма до лиофилизации:

а) оптимальные условия репродукции - 32°С, 72 часа;

б) гемагглютинирующая активность - 1:512;

в) инфекционная активность - 7.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;

г) чувствительность к ингибиторам - ингибиторочувствительный в РТГА с нормальной лошадиной сывороткой;

д) разность в показателях инфекционной активности при 32°С и 37°С - 7.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;

е) разность в показателях инфекционной активности при 32°С и 25°С - 3,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;

ж) структура генома реассортанта:

- гены от эпидемического вируса - НА, NA

- гены от донора аттенуации - РВ2, РВ1, PA, NP, M, NS

6. Характеристика штамма после лиофилизации:

а) дата лиофилизации - 7 июля 2004 г.

б) объем материала в ампуле - 1,0 мл;

в) количество доз в ампуле - 4;

г) инфекционная активность - 7.0 lg ЭИД₅₀/0.2 мл;

д) гемагглютинирующая активность - 1:256.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации - 1:2.

8. Антигенная специфичность:

а) гемагглютинина в РТГА - идентичен вирусу В/Джилин/20/03, крысиной антисывороткой к которому полностью нейтрализуется;

б) нейраминидазы - идентична вирусу В/Джилин/20/03 по данным электрофореза одноцепочечных вирионных РНК в 2,8% ПААГ в присутствии 4,5 М мочевины.

9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении - безвреден.

10. Бактериологический контроль:

дата проведения - 9 июля 2004 года,

результат - стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.

ШТАММ - В/60/ДЖИЛИН/03/1 АРЕАКТОГЕНЕН ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ ЛИЦ

На основе вышесказанного предлагаемый по изобретению вакцинный штамм вируса гриппа может быть использован для профилактики гриппа как у взрослых, так и у детей с трехлетнего возраста, что подтверждают результаты изучения его реактогенности для разных возрастных групп.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа В/60/Джилин/03/1 ГИСК №143 (Государственный институт стандартизации и контроля имени Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей 3-14 лет.

Изобретение "ШТАММ ВИРУСА ГРИППА В/60/Джилин/03/1 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ" (Руденко Лариса Георгиевна, Александрова Галина Ибрагимовна, Ларионова Наталья Валентиновна, Климов Александр Иванович) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога