Способ оценки активности воспалительного процесса при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли

Название	Способ оценки активности воспалительного процесса при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли
Разработчик (Авторы)	Долгов Алексей Борисович, Чураков Алексей Аркадьевич, Захарова Наталья Борисовна, Попков Владимир Михайлович
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2713911
Дата регистрации	11.02.2020
Правообладатель	федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России)
Область применения (класс МПК)	G01N 33/48 (2006.01), G01N 33/53 (2006.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для изучения активности локального воспалительного процесса в предстательной железе с целью выбора адекватного метода лечения хронического абактериального простатита/синдрома хронической тазовой боли (ХАП/СХТБ), а также для контроля за эффективностью проведенной терапии.

Хронический простатит (ХП) является одним из наиболее распространенных заболеваний в современной урологической практике и оказывает существенное негативное влияние на качество жизни мужчины. Согласно данным Европейской ассоциации урологов (EAU) симптомы ХП встречаются у 1-14,2 % мужчин [D. Engeler et al. Chronic pelvic pain. EAU Guidelines. 2018]. При этом согласно современной классификации [G. Bonkat, R.Pickard et al. Urological infections. EAU Guidelines. 2018] выделяют 4 категории ХП: I-острый бактериальный простатит, II- хронический бактериальный простатит; III – хронический абактериальный простатит или синдром хронической тазовой боли (А-воспалительный, B-невоспалительный) и IV – асимптоматический простатит (устанавливается гистологически). Однако бактериальный генез воспаления подтверждается не более чем у 10 % пациентов, у остальных мужчин диагностируется ХАП/СХТБ [G. Bonkat, R.Pickard et al. Urological infections. EAU Guidelines. 2018]. Guidelines EAU ХАП/СХТБ определяется наличием постоянных или периодических болей в области предстательной железы, по меньшей мере 3 из последних 6 месяцев, которые воспроизводятся при ее пальпации, в отсутствие данных за инфекционный или любой другой (со стороны иных органов и систем) генез патологии [D. Engeler et al. Chronic pelvic pain. EAU Guidelines. 2018]. Категории III A (воспалительный) и III B (невоспалительный) отличаются друг от друга наличием лейкоцитов в секрете простаты/сперме/постмассажной порции мочи. Две категории ХАП/СХТБ в настоящее время представляются как разновидности одного заболевания со сложным, многогранным и отличающимся в ряде аспектов патогенезом [Божедомов В.А. Хронический простатит: новая парадигма лечения. Урология. 2016; №3. Приложение 3. С. 1-12]. В связи с этим в медицинской науке и клинической практике в настоящее время господствует мультимодальный подход к лечению ХАП/СХТБ [Magri V. et al. Multidisciplinary approach to prostatitis. Arch Ital Urol Androl. 2019 Jan 18;90(4):227-248. doi: 10.4081/aiua.2018.4.227], при этом тактика лечения определяется диагностическими критериями, полученными на основании жалоб пациента, данных физикального и лабораторно-инструментального обследования. Одним из современных подходов к диагностике и лечению пациентов с ХАП/СХТБ является фенотипирование, в частности, при помощи системы UPOINT [Nickel J.C, Shoskes D. Phenotypic approach to the management of chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome. Curr Urol Rep. 2009 Jul;10(4):307-12]. Тем не менее, большинством специалистов констатируется, что проблема ХАП/СХТБ в настоящее время далека от решения в связи с низкими показателями эффективности его лечения [Magri V. et al. Multidisciplinary approach to prostatitis. Arch Ital Urol Androl. 2019 Jan 18;90(4):227-248. doi: 10.4081/aiua.2018.4.227]. Существенным является и тот факт, что ХП и, в частности, ХАП/СХТБ поражает преимущественно мужчин трудоспособного возраста и может приводить к формированию хронического болевого синдрома, нарушениям сексуальной функции, ухудшению репродуктивного потенциала мужчины и соответственно, демографических показателей населения. Таким образом, поиск новых методов диагностики и лечения ХАП/СХТБ является одной из приоритетных и социально важных задач современной урологии.

Известен традиционный метод диагностики ХП, заключающийся в проведении пробы, предложенной Meares и Stamey в 1968 году [Meares E.M, Stamey TA. Bacteriologic localization patterns in bacterial prostatitis and urethritis. Invest Urol. 1968 Mar;5(5):492-518], суть которой состоит в микроскопическом исследовании первой (VB1), средней (VB2) порций мочи, секрета предстательной железы (EPS) после её массажа и последней порции мочи (VB3). Данный метод применяется с целью топической диагностики воспалительного процесса в нижних мочевых путях. Также с целью дифференциальной диагностики различных форм простатита выполняется двухстаканная проба по Nickel [Nickel J.C. The Pre and Post Massage Test (PPMT): a simple screen for prostatitis. Tech Urol. 1997 Spring;3(1):38-43], заключающаяся в проведении микроскопического и микробиологического исследований пред- (VB2) и постмассажной (VB3) порций мочи.

Существенными недостатками указанных выше методов являются:

• отсутствие гарантированного получения секрета предстательной железы при выполнении её массажа, что может быть связано как с особенностями техники выполнения манипуляции, так и с обструкцией выводных протоков железы;

• возможность контаминации секрета простаты и постмассажной порции мочи микробиотой иной локализации;

• зависимость результатов микроскопического исследования от квалификации специалиста и оборудования (затруднены стандартизированный подход и объективная оценка исследования);

• длительные сроки проведения и многочисленность бактериологических исследований, необходимость соответствующего оснащения лаборатории;

• отсутствие информации о патогенетических механизмах ХАП/СХТБ.

Известны также иные методы диагностики ХП и, в частности, ХАП/СХТБ.

В патенте РФ №2210779 Бюл. №23, 2003 г. МПК G01N 33/92 описывается «Способ диагностики активности течения хронического простатита», основанный на исследовании секрета предстательной железы, в котором производится определение концентрации диеновых коньюгатов и шиффовых оснований, рассчитывается коэффициент активности воспаления, при уменьшении данного показателя активность течения хронического простатита увеличивается.

В патенте RU (11) 2 450 270 МПК G01N 33/483 описан «Способ дифференциальной диагностики хронического простатита», основанный на микроскопии секрета простаты и микробиологическом анализе спермы до и после трех сеансов низкоинтенсивной инфракрасной лазеротерапии с последующим окончательным установлением категории ХП в зависимости от результатов исследований.

В патенте РФ №2103691, Бюл.№3, 1998 г. МПК G01N 33/53, 33/48 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», заключающийся в определении уровня растворимого антигена лейкоцитов - 2 (РАЛ - 2) в эякуляте и в установлении диагноза хронический простатит при его содержании 20 мкг/мл и выше.

В патенте RU 11 2269783 МПК G01 N 33/573 представлен «Способ диагностики хронического абактериального простатита», сущность которого заключается в определении в секрете простаты активности 1-протеиназного ингибитора. При его значении от 2,0 до 3,0 ИЕ/мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) невоспалительной формы, а при 3,0 ИЕ/мл и выше - ХАП воспалительной формы.

В патенте RU 11 2344426 МПК G01 N33/84 описан «Способ дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита», отличающийся тем, что в сперме определяют содержание оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой и при снижении количества выработанного NO фагоцитирующими клетками спермы от 38 до 26 [н/М 2·105 клеток]·10-3 диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 23 [н/М 2·105 клеток]·10-3 и ниже - ХАП невоспалительной формы.

Недостатками перечисленных способов являются неточность диагностики воспалительной формы ХАП/СХТБ, связанная, в том числе, при изучении секрета предстательной железы – со сложностью получения достаточного количества данного вида материала у некоторых пациентов с подозрением на ХАП/СХТБ; а при изучении спермы – с наличием достаточно высокой вероятности иных причин повышения указанных выше показателей (например, воспаления иной локализации).

Также известны способы дифференциальной диагностики форм ХП на основании определения в сыворотке крови активности калликреина (Патент № RU (11) 2272294); активности супероксиддисмутазы и каталазы (Патент № RU (11) 2315318), активности оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой (Патент № RU (11) 2359273). Применение данных методик требует необходимость наличия высококвалифицированной лаборатории и специфического оборудования, что может привести к трудностям воспроизводства данных способов. Кроме того, концентрация перечисленных веществ в периферической крови дает мало информации о состоянии локального иммунитета в предстательной железе.

В патенте RU 11 2263915 МПК G 01 N 33/493 авторы Есенеев С.М. и Боряк В.П. описывают «Способ диагностики хронического простатита», при котором определяется количество лейкоцитов в 1 мл предмассажной и постмассажной порции утренней мочи, и на основании количественного прироста концентрации лейкоцитов устанавливается категория хронического простатита. Недостатками данного способа являются неточность диагностики воспалительной формы ХАП/СХТБ, субъективизм при определении и подсчете лейкоцитов.

Известен также способ диагностики, описанный в статье Naresh V. Desireddi, Phillip L. Campbell, Jeffrey A. Stern, Rudina Sobkoviak et.al. «Моноцитарный хемоаттрактантный протеин-1 (MCP) и макрофагальный воспалительный белок-1α (MIP) как возможные биомаркеры синдрома хронической тазовой боли» [The J Urol. 2008 May; 179(5): 1857–1862. doi: 10.1016/j.juro.2008.01.028]. Данный способ предусматривает изучение цитокинов MIP и MCP-1 в секрете предстательной железы пациентов с ХАП/СХТБ.

Наиболее близким аналогом к заявляемому изобретению по технической сущности является способ диагностики, описанный в статье Huang T.R., Li W., Peng B. «Корреляция воспалительных медиаторов в секрете простаты у пациентов с хроническим простатитом и синдромом хронической тазовой боли» [Andrologia. 2018 Mar; 50(2). doi: 10.1111/and.12860. Epub 2017 Aug 1.] Данный способ основан на определении цитокинов (в том числе интерлейкина-8) в секрете предстательной железы пациентов с ХП и ХАП/СХТБ.

Главным недостатком данного способа диагностики является его сложность, заключающаяся в том числе в получении данного вида биоматериала для исследования (у многих пациентов получение секрета предстательной железы затруднено) и, соответственно, стандартизации этапов исследования и интерпретации результатов.

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа оценки активности воспалительного процесса в предстательной железе при ХАП/СХТБ, доступного к выполнению у всех пациентов, обладающего высокой точностью и чувствительностью, а также стандартизированного на всех этапах проведения.

Сущностью заявляемого изобретения является то, что в способе оценки активности локального воспалительного процесса в предстательной железе при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли ХАП/СХТБ, включающем осуществление после клинического обследования пациентов и проведения массажа предстательной железы сбора биоматериала с последующим его помещением в пробирки со стабилизатором, исследование полученных образцов биоматериала методом твердофазного иммуноферментного анализа с определением концентрации интерлейкина-8 (ИЛ-8), в качестве биоматериала используют постмассажную порцию мочи, в которой методом твердофазного иммуноферментного анализа дополнительно определяют концентрации интерлейкина-6 (ИЛ-6) и моноцитарного хемоаттрактантного протеина (MCP-1), по полученной концентрации цитокинов судят об активности локального воспалительного процесса, при повышении одной из концентраций указанных цитокинов: выше 14 пг/мл для интерлейкина-6; 48 пг/мл для интерлейкина-8 и 362 пг/мл для моноцитарного хемоаттрактантного протеина констатируют наличие воспалительного процесса в предстательной железе.

Технический результат заявляемого изобретения.

Такой технический прием как использование в качестве исследуемого биоматериала постмассажной порции мочи позволяет проводить оценку активности воспалительного процесса у всех пациентов в связи с доступностью получения биоматериала, что отсутствовало в наиболее близких аналогах. При этом данный вид биоматериала стабилен при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (до года). Данный способ обладает высокой точностью и чувствительностью в связи с дополнительным исследованием концентраций ИЛ-6 и MCP-1. Применение в качестве биоматериала постмассажной порции мочи позволяет также стандартизировать все этапы реакции, упрощая процесс и обеспечивая повышение точности полученных результатов.

Способ оценки активности локального воспалительного процесса в предстательной железе при ХАП/СХТБ, основанный на определении уровней цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8 и MCP-1 в постмассажной порции мочи, позволяет:

• на основании полученных данных оценить наличие локального воспаления в предстательной железе;

• на основании полученных результатов осуществить своевременное адекватное патогенетическое лечение;

• на основании полученных результатов проводить контроль проводимой терапии заболевания.

Заявляемое изобретение поясняется с помощью Фиг., на которой изображена система для забора мочи. На Фиг. позициями 1-5 обозначены:

1 – контейнер стерильный со встроенным держателем вакуумной пробирки для посева мочи;

2 – стерильные вакуумные пробирки для анализа мочи с различными стабилизаторами;

3 – держатель для безопасного отбора мочи в пробирку из контейнеров разного типа;

4 – контейнер стерильный для мочи;

5 – контейнер стерильный для мочи со встроенным в крышку крестовидным клапаном.

Способ оценки активности воспалительного процесса при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли используют следующим образом.

Первоначально осуществляют клиническое обследование пациента с помощью стандартных методов, то есть с оценкой жалоб и соматического статуса, детальным сбором анамнеза с выявлением факторов, влияющих на иммунный статус, урологическое обследование с пальцевым исследованием предстательной железы трансректально. Также пациента дополнительно обследуют на инфекции, передающиеся половым путем, методом полимеразной цепной реакции.

После клинического обследования пациента проводят сбор биоматериала – постмассажной порции мочи. Сбор биоматериала осуществляют следующим образом: перед проведением массажа предстательной железы пациент осуществляет мочеиспускание. Затем проводят массаж предстательной железы по стандартной методике. После массажа предстательной железы в срок до 5 минут пациент осуществляет мочеиспускание и осуществляется забор первых 10-30 мл постмассажной порции мочи в контейнер с клапанной крышкой. Сразу после сбора мочи контейнер плотно закрывают завинчивающейся крышкой (Фиг.). Образец мочи доставляется в лабораторию в течение 2-х часов после взятия при +4°С, образец нельзя замораживать.

В лаборатории для пробоподготовки образцов постмассажной порции мочи и последующего определения профиля цитокинов она переносится с помощью держателя (Фиг.) в пробирки для мочи со стабилизатором и нумеруется. В пробирках моча может храниться до проведения анализа не более 2-3 часов. Методом твердофазного ИФА тестируют свежеприготовленные образцы. Если это невозможно, то для исключения бактериального пророста проба может быть перенесена в пробирки типа Эппендорф и храниться в замороженном виде при Т -20-40°С в случае необходимости более позднего проведения анализа, при этом не допускают даже однократного оттаивания образцов.

Определение уровня цитокинов в моче проводят методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реактивов.

Способ был апробирован в клинике урологии Саратовского государственного медицинского университета, НИИ фундаментальной и клинической уронефрологии Саратовского ГМУ и Центральной научно-исследовательской лаборатории СГМУ на 112 больных и показал высокую информативность.

С целью оценки достоверности применения заявляемого способа осуществляли параллельно подсчет числа лейкоцитов в постмассажной порции мочи. Была проведена микроскопия данного вида биоматериала с подсчетом числа лейкоцитов. Для нормы количество лейкоцитов составляет до 10 клеток в поле зрения, повышение числа лейкоцитов свидетельствует о наличии воспалительного процесса (ХАП/СХТБ категории IIIА). Эти данные совпали с выводами, сделанными по заявляемому способу – о наличии воспалительного процесса в ткани простаты.

Преимущество предлагаемого способа по сравнению с ближайшим аналогом состоит в том, что он позволяет получать биоматериал у всех пациентов (исследование постмассажной порции мочи возможно во всех случаях в отличие от микроскопии секрета предстательной железы), проводить объективную стандартизированную диагностику ХАП/СХТБ и оценивать наличие воспалительного процесса, а также может быть применен для мониторинга эффективности лечения с использованием единых критериев.

Формула изобретения

Способ оценки активности локального воспалительного процесса в предстательной железе при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли ХАП/СХТБ, включающий осуществление после клинического обследования пациентов и проведения массажа предстательной железы сбора биоматериала с последующим его помещением в пробирки со стабилизатором, исследование полученных образцов биоматериала методом твердофазного иммуноферментного анализа с определением концентрации интерлейкина-8, отличающийся тем, что в качестве биоматериала используют постмассажную порцию мочи, в которой методом твердофазного иммуноферментного анализа дополнительно определяют концентрации интерлейкина-6 и моноцитарного хемоаттрактантного протеина, по полученной концентрации цитокинов судят об активности локального воспалительного процесса, при повышении одной из концентраций указанных цитокинов: выше 14 пг/мл для интерлейкина-6; 48 пг/мл для интерлейкина-8 и 362 пг/мл для моноцитарного хемоаттрактантного протеина констатируют наличие воспалительного процесса в предстательной железе.

Изобретение "Способ оценки активности воспалительного процесса при хроническом абактериальном простатите/синдроме хронической тазовой боли" (Долгов Алексей Борисович, Чураков Алексей Аркадьевич, Захарова Наталья Борисовна, Попков Владимир Михайлович ) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога