СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ГИПЕРПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ШЕЙКИ МАТКИ

Название	СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ГИПЕРПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ШЕЙКИ МАТКИ
Разработчик (Авторы)	Киселёва Валентина Ивановна, Замулаева Ирина Александровна, Крикунова Людмила Ивановна, Мкртчян Лиана Сирекановна, Куевда Дмитрий Александрович, Саенко Александр Семенович, Цыб Анатолий Фёдорович, Горбушин Николай Григорьевич
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2503960
Дата регистрации	11.05.2012
Правообладатель	Федеральное государственное бюджетное учреждение "Медицинский радиологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации " (ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России)
Область применения (класс МПК)	G01N 33/48 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01), C12Q 1/70 (2006.01)
Медаль имени А.Нобеля

Описание изобретения

Изобретение относится к области медицины, точнее к области молекулярной диагностики цервикальных интраэпителиальных неоплазий (cervical intraepithelial neoplasia - CIN) с потенциальным риском развития рака шейки матки (РШМ).

Рак шейки матки занимает второе место среди заболеваний злокачественными опухолями органов женской половой системы. В настоящее время убедительно доказана этиологическая роль вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) в развитии гиперпролиферативных изменений эпителиоцитов шейки матки от дисплазий разной степени тяжести до злокачественных новообразований [1, 2]. Из всех известных в настоящее время ВПЧ ВКР 16 тип является наиболее распространенным и относится к числу вирусов, обладающих наиболее высоким канцерогенным потенциалом [3-5]. Персистирующая инфекция канцерогенными типами ВПЧ может привести к развитию CIN [3, 4, 6-8]. При этом, изменения низкой степени тяжести (CIN I) спонтанно регрессируют у 60% женщин, и только у 1% пациенток указанная патология переходит в инвазивный рак. Изменения умеренной и тяжелой степени (CIN II, CIN III) регрессируют лишь у 40% и 33% женщин соответственно и практически у 5% и 12% больных прогрессируют в инвазивный рак [9-11]. Поэтому крайне актуальной задачей является разработка способов прогнозирования течения CIN на индивидуальном уровне.

Известно достаточно большое количество зарубежных и российских изобретений по использованию разнообразных молекулярно-генетических и других методов выявления и оценки ВПЧ-инфекции с целью диагностики, прогнозирования течения и мониторинга лечения предраковых заболеваний шейки матки, а также оценки риска возникновения и диагностики РШМ, в том числе на ранней стадии.

Известен комплексный способ диагностики ВПЧ-инфекции и прогнозирования ее течения (персистирующее или транзиторное) (RU 2379690). Он включает сбор анамнеза и комплексное клинико-лабораторное обследование. К анамнестическим признакам относят отягощенную онкологическую наследственность, раннее начало половой жизни, возраст до 20 лет и промискуитет. Клинические признаки - это аногенитальные бородавки, эрозии и эктопии шейки матки, контактная кровоточивость, Ovuli nabotti, воспалительные заболевания органов малого таза и наличие внутриматочной спирали. В качестве лабораторных признаков принимают инфекции, передаваемые половым путем, микстинфицирование, дефицит лактобактерий, дисбиоз влагалища, вызванный условно-патогенной флорой, бактериальный вагиноз, вирус-вирусные ассоциации, урогенитальный герпес и др., а также инфицирование ВПЧ различных генотипов. Каждый признак оценивают по балльной системе и в зависимости от количества баллов диагностируют персистирующее или транзиторное течение папилломавирусной инфекции или подвергают дополнительному обследованию. Способ позволяет определить тактику дальнейшего ведения пациента, сформировать группы потенциального риска развития очаговых диспластических и злокачественных трансформаций эпителия урогенитального тракта.

Описанный способ не учитывает физический статус вируса, это - эписомальная форма, когда ДНК вируса не интегрирована в клеточный геном или интегрированная форма, когда ДНК вируса интегрирована в геном клетки-хозяина, и количественные показатели ВПЧ-инфекции (вируса).

Известен способ прогнозирования предраковых заболеваний шейки матки у женщин с папилломавирусной инфекцией (патент RU 2310197). Серийные срезы слизистой оболочки шейки матки женщин с папилломавирусной инфекцией исследуют иммуногистохимическим методом: обрабатывают по стрептавидин-биотиновому пероксидазному методу и инкубируют с антителами к антигену ядер пролиферирующих клеток - PCNA и к ингибитору апоптоза BCL-2. Определяют митотический индекс, апоптозный индекс (АИ), индекс метки PCNA (ИМ PCNA) и индекс метки BCL-2 (ИМ BCL-2), после чего рассчитывают коррелятивный индекс пролиферации (КИП) по формуле: КИП=Митотический индекс (ИМ PCNA (ИМ BCL - 2/АИ. Если у больных с цервикальной интраэпителиальнй неоплазией I степени значение КИП превышает 114,0, то предполагают высокую вероятность перехода заболевания в стадию цервикальной интраэпителиальной неоплазии П степени, а если значение КИП превышает 208,0, предполагают высокую вероятность перехода заболевания в стадию цервикальной интраэпителиальной неоплазии III степени или развития онкологической патологии шейки матки. Использование способа позволяет осуществить раннюю диагностику продолжения опухолевого роста и скорректировать индивидуальное лечение.

Способ не учитывает количественные показатели ВПЧ-инфекции и физический статус вируса.

Изобретение по заявке CN 1570646 (А) раскрывает способ ранней диагностики рака матки, связанного с ВПЧ 16/18 на основе выявления антител к ранним и поздним белкам ВПЧ 16/18 с помощью специальных полипептидов.

Изложенный способ не учитывает количественные показатели ВПЧ-инфекции и физический статус вируса.

Известно изобретение по патенту LT5228 (В), в котором на основании методов генной инженерии осуществляют раннее выявление неблагоприятного течения папилломавирусной инфекции. Способ ранней in vitro диагностики дисплазии шейки матки и рака включает количественное определение онкобелка Е7 ВПЧ 16 и ВПЧ 18 с использованием меченных моноклональных антител (716-281 и 716-332), которые распознают различные антигенные детерминанты онкобелка Е7. Количество Е7 ВПЧ 16 и ВПЧ 18 коррелирует со злокачественной трансформацией эпителиальных клеток: уровень Е7 онкобелка вируса, соответствующий 40 пг/мл - 50 нг/мл, свидетельствует о дисплазии и раке шейки матки.

Способ прогнозирования течения папилломавирусной инфекции (или ранней диагностики патологии шейки матки (дисплазии и рака)) не учитывает такой количественный показатель ВПЧ-инфекции как число копий ДНК, и физический статус вируса.

Известно изобретение (US 2010330550 (А1)), относящееся к in vitro методам скрининга персистирующей ВПЧ инфекции 5 типов (ВПЧ 16, 18, 31, 33 и 45) и оценке экспрессии мРНК вирусных онкогенов Е6 и/или Е7. Наличие транскриптов Е6 и/или Е7 может быть использовано в качестве молекулярного маркера клеточных изменений, ассоциированных с персистирующей ВПЧ-инфекцией, для того, чтобы различить цервикальные поражения высокой и низкой степени. В частности, для различения гистологически верифицированной CIN III без анэуплоидных клеток и CIN III с анэуплоидными клетками. Отмечается, что РНК-тест имеет сходную с гистологическим исследованием специфичность, но более высокую чувствительность. Методы применимы в контексте скрининга рака шейки матки.

В рассматриваемом изобретении не учитываются такой количественный показатель ВПЧ-инфекции как число копий ДНК и физический статус вируса.

Известны биомаркеры, которые коррелируют с прогрессией ВПЧ-индуцированной неоплазии шейки матки в рак, предложено использовать их с целью диагностики ВПЧ-ассоциированного РШМ и предраковых заболеваний (US 2010316990 (А1)). К числу таких биомаркеров относятся корнулин, РА28 [beta], DJ-1, актин, транстиретин, HSPB1, CV внутриклеточного канала 1, цитокератин 8, трансферрин, HSP20, афлатоксина редуктаза, (alpha)2 коллаген 1 типа, креатинкиназа В, цитокератин 13, GSTP, РА28 (alpha), марганец-зависимая СОД, ламин А/С, В1 серпин (ингибитор эластазы), серпин ВЗ (SCAA1), цитокератин 10, цитокератин 6А, и trp-тРНК синтетаза. Популярные биомаркеры для ВПЧ-индуцированного рака включают корнулин, DJ-1, РА28 (alpha), и РА28 [бета], trp-тРНК синтетазу, HSP[beta]6, креатинкиназу В, афлатоксин редуктазу, GSTP, транстиретин, трансферрин, (alpha)2-тип коллагена 1, а также их комбинации.

Изложенный подход не учитывает количественные показатели ВПЧ-инфекции и физический статус вируса.

Прототипом предлагаемого изобретения является международная заявка WO 2010129941 (А1), в которой представлены наборы и способы диагностики цервикальных заболеваний. Способы включают измерение уровня экспрессии онкогенов Е6 и/или Е7 ВПЧ ВКР в биологических образцах. Уровень Е6 и/или Е7 мРНК положительно коррелирует с прогрессированием заболеваний шейки матки. Порог уровня экспрессии Е6 и Е7 мРНК обеспечивает разграничение нормальных цервикальных образцов от патологических клеток или тканей; а также образцов с цервикальными поражениями высокой степени (с тяжелыми дисплазиями) от образцов с низкой степенью поражения (легкими дисплазиями).

К недостаткам данного способа можно отнести технические сложности работы с РНК-материалом и необходимость использования дорогостоящих реактивов, что, несомненно, ограничивает возможность использования его в обычных клинических лабораториях. Кроме того, изложенный способ не учитывает такой количественный показатель ВПЧ-инфекции как число копий ДНК и физический статус вируса.

Таким образом, известно достаточно много способов, связанных с прогнозированием течения гиперпролиферативных заболеваний шейки матки (в том числе CIN) и их прогрессии в РШМ, основанные на качественном и количественном определении различных биомаркеров, которыми, как правило, являются продукты вирусных или клеточных генов, инфицированных больных. Вместе с тем не обнаружено комплексного молекулярно-генетического подхода, одновременно учитывающего различные качественные и количественные характеристики самого генетического материала ВПЧ, такие как генотип вируса, физический статус вирусной ДНК (эписомальная или интегрированная форма) и ее количественная нагрузка.

Технический результат предлагаемого изобретения заключается в возможности раннего выявления пациентов с неблагоприятным прогнозом течения CIN и высоким риском развития РШМ за счет интегральной оценки качественных и количественных показателей ДНК ВПЧ: генотипа, физического статуса и количественной нагрузки - числа копий ДНК вируса в клетке.

Сущность изобретения заключается в способе раннего выявления пациенток с CIN, имеющих неблагоприятное течение и высокую вероятность перехода в рак, на основе нового подхода, учитывающего одновременно генотип ВПЧ, количество копий ДНК вируса, присутствующего в клетке-хозяина в эписомальной или интегрированной форме. При этом из биологических образцов - соскобы из цервикального канала или соответствующие биоптаты UIM больных, выделяют ДНК вируса и выявляют в ней наличие 12 наиболее распространенных генотипов высокого канцерогенного риска. Затем отбирают пациенток с ВПЧ16-позитивной CIN и методом ПЦР в режиме реального времени определяют количество геномных эквивалентов Е7, Е2 вируса и клеточного гена b-глобина. По их соотношению оценивают количественную нагрузку вируса, а также наличие интеграции его ДНК в геном клетки-хозяина. Далее устанавливают критерий неблагоприятного прогноза в соответствии с физическим статусом вируса и его количественной нагрузкой: ≥6.5 lg копий ДНК ВПЧ16 на 100 тыс.клеток при эписомальной форме или <6.5 lg копий ДНК ВПЧ16 на 100 тыс.клеток при интегрированной форме вируса. В соответствии с этими критериями прогнозируют неблагоприятное течение CIN и возможный переход этого заболевания в РШМ.

Перечень фигур;

Фиг.1 - Корреляция количественной нагрузки ВПЧ 16 в соскобах из цервикального канала и соответствующих биоптатах ШМ больных CIN и РШМ.

Фиг.2 - Корреляция степени интеграции ДНК ВПЧ 16 в соскобах из цервикального канала и соответствующих биоптатах ШМ больных CIN и РШМ.

Способ осуществляют следующим образом:

1) получение биологического материала: у больных CIN цитощеткой берут соскобы эпителиальных клеток из цервикального канала и наружной поверхности шейки матки (ШМ), а при отсутствии противопоказаний к инвазивному вмешательству - соответствующие биоптаты ШМ (фрагменты ткани ШМ);

2) из полученного биологического материала выделяют ДНК сорбентным методом с применением наборов «ДНК-сорб AM» - для соскобов и «ДНК-сорб С» - для биоптатов (ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (ФГУН ЦНИИЭ), Россия) или аналогичных наборов других фирм;

3) полученные образцы исследуют на наличие вируса и определяют его генотип методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием комплекта реагентов «АмплиСенс ВПЧ ВКР генотип-FL» ФГУН ЦНИИЭ или аналогичных реагентов других фирм;

4) отбирают образцы с ВПЧ 1 6-положительными результатами;

5) методом мультиплексной ПЦР в режиме реального времени определяют количество ДНК вирусных генов Е7 и Е2 (известно, что ген Е7 присутствует в обеих формах вируса - эписомальной и интегрированной, а ген Е2 присутствует только в эписомальной форме вируса), параллельно оценивают количество ДНК b-глобина человека, что соответствует 1/2 количества клеток в анализируемом образце (1 клетка содержит 2 молекулы b-глобина). Все три мишени - Е7, Е2 и b-глобин амплифицируют в одной пробирке. Одновременно в каждом опыте амплифицируют стандартные образцы с известной концентрацией ДНК ВПЧ и ДНК b-глобина человека;

6) анализ образцов проводят на амплификаторах "iCycler iQ" (BioRad, Германия) и "Rotor Gene" ("Corbett Research", Австралия) или аналогичных приборах других фирм. Каждый клинический образец и стандартные образцы исследуют в нескольких повторах;

7) количество геномных эквивалентов Е7, Е2 и b-глобина определяют по калибровочным кривым. Калибровочные кривые получают на стандартных образцах (п.5) в соответствии с программой амплификаторов "iCycler iQ", "Rotor Gene" или аналогичных приборов других фирм;

8) наличие интеграции ДНК вируса в геном клетки-хозяина оценивают по величине среднего значения соотношения геномных эквивалентов Е7/Е2 для нескольких повторов;

9) количество ДНК вируса оценивают по величине среднего значения соотношения геномных эквивалентов Е7/b-глобин в логарифмах, нормализованных на 100 тыс.клеток (1 клетка содержит 2 b-глобина);

10) экспериментальным путем устанавливают пороговый уровень вирусной нагрузки: высокая нагрузка соответствует количеству копий ДНК ВПЧ на 100 тысяч клеток ≥6,5 lg, а низкая<6,5 lg копий ДНК ВПЧ на 100 тысяч клеток;

11) классифицируют пациенток в зависимости от физического статуса ВПЧ на подгруппы с эписомальной или интегрированной формой вируса (п.5). В этих подгруппах определяют вирусную нагрузку - количество копий ДНК вируса на 100 тыс.клеток (п.10);

12) выявляют пациенток с неблагоприятным прогнозом, имеющих высокую вирусную нагрузку при эписомальной форме ВПЧ или низкую вирусную нагрузку при интегрированной форме.

Примеры реализации способа

Пример 1. Выявление пациенток с ВПЧ16-позитивными РШМ и CIN

У первичных больных отделения лучевых и комбинированных методов лечения гинекологических заболеваний ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития и России, г.Обнинск и женской консультации №4, г.Калуга) с гистологически верифицированными РШМ I-IV стадий (137 человек) и CIN различной степени тяжести (49 человек) до лечения брали соскобы из цервикального канала и наружной поверхности ШМ, а у части больных также брали соответствующий биопсийный материал.

Из полученных образцов выделяли ДНК с использованием коммерческих тест-наборов, описанных выше.

Методом ПЦР в режиме реального времени на "iCycler iQ" ("BioRad", Германия) и "Rotor Gene" ("Corbet Research", Австралия) проводили генотипирование ДНК вируса с использованием коммерческих тест-наборов в соответствии с заявляемой методикой, подробно описанной выше.

Отбирали образцы, инфицированные либо одним ВПЧ 16, либо несколькими ВПЧ ВКР одновременно (множественная инфекция), среди которых ВПЧ 16 являлся ведущим генотипом. В группе РШМ обнаружено 85 таких образцов (62,0%) в группе CIN - 25 образца (51,0%), при этом на долю множественной инфекции приходилось лишь 7 и 4 случая соответственно.

Пример 2. Анализ количественной нагрузки и физического статуса вируса в биологических образцах - соскобах из цервикального канала и биоптатах ШМ

У 85 больных РШМ и 25 больных CIN с выявленной ВПЧ16 инфекцией проведено исследование количественной нагрузки и физического статуса ДНК вируса в соскобах из цервикального канала из них у 40 больных РШМ, не имеющих противопоказаний к инвазивному вмешательству - в биоптатах шейки матки. В соответствии с заявляемым способом число копий ДНК ВПЧ в клетке оценивали по соотношению геномных эквивалентов Е7 вируса и b-глобина клетки (Е7/b-глобин) и нормировали эту величину на 100 тыс.клеток. Наличие интеграции ДНК вируса в геном клетки-хозяина в соответствии с заявляемым способом оценивали по соотношению геномных эквивалентов Е7/Е2 с учетом коэффициента вариации (CV%) для трех повторов согласно разработанным критериям: если при CV% ≤10% Е7/Е2≥1,2-2,0 - интеграция обнаружена, если Е7/Е2<1,2-2,0 - интеграция не обнаружена.

Интегрированная форма ДНК вируса обнаружена у 33 больных РШМ и 7 больных CIN, эписомальная форма - у 52 и 18 больных соответственно; количество больных CIN с эписомальной формой ДНК вируса и высокой вирусной нагрузкой составляет 2, с интегрированной формой ДНК вируса и высокой вирусной нагрузкой - 5; количество больных РШМ с эписомальной формой ДНК вируса и высокой вирусной нагрузкой составляет 20, с интегрированной формой ДНК вируса и высокой вирусной нагрузкой - 3.

Пример 3. Сравнительное исследование количественной нагрузки и физического статуса вируса в соскобах из цервикального канала и соответствующих биоптатах ШМ

Проведено сравнение данных по количественной нагрузке вируса, полученных в соответствии с заявляемым способом, для биоптатов шейки матки 40 больных РШМ с соответствующими данными для соскобов из цервикального канала этих же больных, и выявлен высокий уровень корреляции их между собой. Коэффициент корреляции R=0,889 при уровне значимости р<0,000001 (фиг.1).

Из этих 40 больных наличие интеграции ДНК вируса в геном клетки-хозяина обнаружено у 15 человек. Показатели корреляции данных по интеграции ДНК ВПЧ, полученных для соскобов из цервикального канала и биоптатов ШМ соответствуют: R=0,78; р=0,0006; n=15 (фиг.2).

Корреляционный анализ проведен с использованием пакета программ "Statistica-6".

Высокая корреляция результатов, полученных при исследовании разных биологических образцов - соскобов из цервикального канала и биоптатов ШМ, свидетельствует о пригодности того и другого материала для осуществления заявляемого способа прогнозирования. Полученные данные являются основанием для использования в заявляемом способе щадящей неинвазивной техники получения биологического материала.

Пример 4. Относительный шанс (odds ratio - OR) возникновения РШМ в группе больных CIN с неблагоприятным прогнозом

25 первичных больных с гистологически верифицированными ВПЧ16-позитивными CIN были условно разделены на группы с благоприятным и неблагоприятным сочетанием факторов в зависимости от физического статуса ВПЧ 16 (эписомальная или интегрованная форма ДНК вируса) и выявленного количества копий ДНК вируса в соответствии с заявляемым способом. На такие же группы соответственно были разделены 85 больных с гистологически верифицированными ВПЧ16-позитивными РШМ. Далее проводили сравнение количества лиц с неблагоприятным и благоприятным сочетаниями факторов в группах больных РШМ и CIN по критерию Фишера (пакет программ "Statistica-6"), а также рассчитывали величину и доверительный интервал OR (относительный шанс возникновения РШМ у больных CIN) по формулам, приведенным в книге О.Ю.Ребровой, 2006 [12]. Указанное сравнение выполнено как для каждого из неблагоприятных сочетаний (группы №2 и №3), так и для их объединенной группы (№1) против группы №4 (таблица 1).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что неблагоприятное сочетание факторов, характеризующих ВПЧ-инфекцию, встречается статистически значимо чаще у больных РШМ, чем у больных CIN: уровень значимости р по двустороннему критерию Фишера составляет 0,0002 для группы №1; 0,001 - для группы №2 и 0,01 - для группы №3.

Расчеты также показывают, что при неблагоприятном сочетании факторов риск возникновения рака у больных CIN с эписомальной формой и высокой нагрузкой вируса в 6,0 раз выше, чем у остальных больных (доверительный интервал - ДИ для OR - [2,3; 24,2]), а у больных CIN с интегрированной формой и низкой нагрузкой вируса в 9,0 раз выше соответственно (ДИ для OR - [1,9; 42,3]). Больные с неблагоприятным прогнозом течения заболевания в соответствии с данными критериями составляют 16% среди всех представленных ВПЧ16-позитивных случаев CIN.

Подтверждение достижения технического результата.

Пример 1 демонстрирует долю больных CIN, к которым применяется заявляемый способ прогнозирования течения заболевания.

Пример 2 демонстрирует долю больных с интегрированной и эписомальной формой ДНК вируса и высокой вирусной нагрузкой среди пациентов с СЕМ и РШМ, к которым применяется заявляемый способ прогнозирования течения заболевания.

Пример 3 доказывает возможность использования в заявляемом способе как биоптатов ШМ, так и соскобов эпителиальных клеток из цервикального канала, тем самым обосновывая применение менее инвазивного способа получения материала для исследования.

Пример 4 ретроспективно доказывает эффективность заявляемого способа раннего выявления пациентов с неблагоприятным течением CIN. Установлены критерии, соответствующие неблагоприятному сочетанию факторов, характеризующих ВПЧ-инфекцию: высокая вирусная нагрузка (≥6,5 lg копий ДНК ВПЧ на 100 тысяч клеток) при эписомальной форме (Е7/Е2<1,2-2,0) или низкая нагрузка (<6,5 lg копий ДНК ВПЧ на 100 тысяч клеток) при частично или полностью интегрированной форме вируса (Е7/Е2≥1,2-2,0).

Использование способа позволяет сформировать среди больных CIN группы повышенного риска развития злокачественной трансформации эпителия ШМ и, соответственно, может позволить управлять средствами лечения и профилактики во времени, предотвращая таким образом развитие онкологического заболевания.

Заявляемый способ - относительно несложный в исполнении и относительно не дорогостоящий (по сравнению с прототипом), что делает его применение доступным в лабораториях обычных клиник.

Формула изобретения

1. Способ оценки состояния гиперпролиферативных заболеваний шейки матки, включающий подготовку биологического материала - соскобы эпителиальных клеток из цервикального канала и биоптаты шейки матки у больных с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями, выявление и генотипирование ДНК вируса папилломы человека, отличающийся тем, что отбирают биологические образцы с ВПЧ16-позитивной цервикальной интраэпителиальной неоплазией, проводят полимеразную цепную реакцию, затем определяют количество ДНК вирусных генов Е7, Е2 и клеточного гена b-глобина, по их соотношению устанавливают наличие интеграции вируса в геном клетки и его количественную нагрузку, в соответствии с которыми прогнозируют состояние неблагоприятного течения цервикальной интраэпителиальной неоплазии с прогрессией заболевания в рак шейки матки.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при эписомальной форме ДНК вируса Е7/Е2<1,2-2,0 и высокой вирусной нагрузке ≥6,5 lg прогнозируют неблагоприятное течение заболевания с прогрессией в рак шейки матки.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что при интегрированной форме ДНК вируса Е7/Е2≥1,2-2,0 и низкой вирусной нагрузке <6,5 lg прогнозируют неблагоприятное течение заболевания с прогрессией в рак шейки матки.

Изобретение "СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ГИПЕРПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ШЕЙКИ МАТКИ" (Киселёва Валентина Ивановна, Замулаева Ирина Александровна, Крикунова Людмила Ивановна, Мкртчян Лиана Сирекановна, Куевда Дмитрий Александрович, Саенко Александр Семенович, Цыб Анатолий Фёдорович, Горбушин Николай Григорьевич) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога