ПИТАТЕЛЬНАЯ ДВУХФАЗНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ТРИХОМОНАД

Название	ПИТАТЕЛЬНАЯ ДВУХФАЗНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ТРИХОМОНАД
Разработчик (Авторы)	Бойко Оксана Витальевна, Николаев Александр Аркадьевич, Бойко Андрей Виталиевич, Плосконос Мария Вячеславовна, Луцкий Дмитрий Леонидович, Гудинская Наталья Игоревна
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2272834
Дата регистрации	05.12.2003
Правообладатель	Николаев Александр Аркадьевич
Область применения (класс МПК)	C12N 1/10 (2006.01) C12R 1/90 (2006.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к области медицины, а именно микробиологии, и может быть использовано, в частности, для культуральной диагностики трихомоноза.

В связи с недостаточно высокой чувствительностью, субъективизмом при микроскопической постановке диагноза «трихомоноз» и в соответствии с многочисленными Приказами и Инструкциями идентификацию Trichomonas vaginalis проводят культуральным методом, являющимся, по мнению большинства исследователей, «золотым стандартом»: высокочувствительным и специфическим. В значительной степени эффективность его зависит от качества используемых питательных сред. В состав применяемых сред входят мясопептонный бульон (МПБ), препараты печени, минеральные соли, сахара, сыворотка крови человека или животных, соляно-кислый цистеин и другие ингредиенты (Методические рекомендации по приготовлению новых питательных сред для культуральной диагностики трихомоноза утверждены Министерством здравоохранения СССР 18.04.77 г. №10-8/23).

Так, например, начиная с 40-х годов прошлого века широкое распространение получила среда Джонсона-Трасселя (CPLM), которая в модификации ЦНИИКВИ представляет собой жидкую среду зеленоватого цвета, обладающую высокими ростовыми качествами, однако она нестандартна (готовится в лабораторных условиях), имеет ограниченный срок годности.

В 70 - 80-х годах в отделе микробиологии ЦНИИКВИ разрабатывались оригинальные питательные среды для культуральной диагностики трихомоноза, которые с успехом использовались на протяжении ряда лет. Вместе с тем, все они страдают теми же недостатками, что и среда Джонсона-Трасселя, и в последние годы практически не применяются в практике. В состав этих сред входят: смесь гидролизата казеина и гидролизина или аминопептида, отходов фармацевтической промышленности при изготовлении лизоцима, ферментативных гидролизатов биомассы, микроорганизмов, а также экстракта кормовых дожжей. Эти и другие модификации описаны в Приказе №936 и Пособии «Лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза» (Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. - Москва: Медицинская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА, 2003. С.44-67, 161-182, 242-254).

К середине 90-х годов сложилась парадоксальная ситуация: при эпидемии инфекций передаваемых половым путем (ИППП), и в том числе трихомоноза, в России фактически отсутствовал производственный выпуск стандартных питательных сред для культуральной диагностики этого заболевания. В практике использовались среды, приготовленные в лабораториях, что, естественно, сказывалось на их качестве.

В то же время имеется настоятельная необходимость шире использовать культуральную диагностику трихомоноза, необходимую при постановке диагноза, особенно при сомнительных результатах микроскопии, а также при хроническом рецидивирующем инфекционном процессе, обследовании детей, беременных женщин и ряде других случаев.

Использование питательной среды с высокими ростовыми показателями, стандартного состава и простотой приготовления несомненно приведет к адекватной диагностике такого широко распространенного, отягощенного разнообразными осложнениями заболевания, как мочеполовой трихомоноз.

Наиболее близкой по составу к предлагаемой среде является среда следующего состава: питательная среда 199 - 10 мл, солевой раствор - 100 мл, дрожжевой автолизат - 10 мл, сыворотка крупного рогатого скота или лошади - 30 мл, 20%-ный раствор мальтозы - 10 мл, пенициллин - 160000 ЕД и стрептомицин - 160000 ЕД (Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. - Москва: Медицинская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА, 2003. C.180-181).

Однако применение этой среды не исключает необходимость последующей микроскопии с целью установления наличия трихомонад в исследуемом материале. Целью представленного изобретения является повышение чувствительности среды для выделения трихомонад.

Поставленная цель достигается тем, что предлагаемая питательная двухфазная среда содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой, в количестве 5 мл и жидкую фазу, содержащую питательную среду 199, в количестве 5 мл с раствором натриевой соли бензил-пенициллина 10000-30000 ЕД /мл и раствором стрептомицина 10000-30000 мкг/мл - 1 мл соответственно.

Предлагаемая среда была апробирована на кафедре общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии на 50 образцах материала от больных в течение 2003 г.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример №1.

Для приготовления среды используют компоненты в следующих количествах, мл:

Твердая фаза:

Коагулированная сыворотка «косячком» в пробирке - 5

Жидкая фаза:

Среда 199 - 5

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 10000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 10000 мкг/мл - 1

Антибиотики разводят каждый в 1 мл 0,9% стерильного раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

Посев исследуемого материала осуществляют на поверхность коагулированной сыворотки штрихом бактериологической петлей. Затем на сыворотку наслаивают среду 199 с антибиотиками.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С до 7 суток при отсутствии роста в течение первых дней. При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост. Бесприборная визуализация роста трихомонад возможна еще и потому, что среда 199 содержит цветной индикатор, который в случае роста клеток и как следствие этого изменения рН раствора изменяет цвет с красного на желтый.

Пример №2.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах, мл:

Твердая фаза:

Коагулированная сыворотка «косячком» в пробирке - 5

Жидкая фаза:

Среда 199 - 5

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 20000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 20000 мкг/мл - 1

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост при изменении цвета жидкой фазы.

Пример №3.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах, мл:

Твердая фаза:

Коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке - 5

Жидкая фаза:

Среда 199 - 5

Р-р натриевой соли бензил-пенициллина 30000 ЕД /мл - 1

Р-р стрептомицина 30000 мкг/мл - 1

Антибиотики разводят каждый в 1 мл 0,9% стерильного раствора хлорида натрия и асептически вносят в среду 199.

При наличии трихомонад в исследуемом материале на границе раздела сред отмечается их обильный рост и изменение цвета жидкой фазы.

При посеве на предлагаемую среду материала от больных рост сопутствующей бактериальной флоры подавляется.

В таблице 1 даны результаты испытания трех вариантов предлагаемой среды.

Преимуществом предлагаемой среды является ускорение роста трихомонад по сравнению с ростом на среде Био-Рад в связи с тем, что среда 199 содержит питательные компоненты, необходимые для роста эукариотических клеток, к которым и относятся трихомонады. В таблице 2 даны результаты чувствительности известной и предлагаемой сред при посеве трихомонад.

Кроме того, наличие роста трихомонад при посеве их на предлагаемую среду считывается визуально в результате изменения цвета рН-индикатора, в связи с чем отпадает необходимость в последующей микроскопии, что ускоряет процесс постановки диагноза и делает анализ менее трудоемким и дорогостоящим.

Таким образом, использование новой среды значительно повышает чувствительность бактериологического исследования, направленного на выявление трихомонад в материале от больных и обследуемых лиц.

Изобретение может быть рекомендовано к применению в практическом здравоохранении в венерологических, урологических и андрологических учреждениях, а также в научной работе лабораторий соответствующего профиля.

Формула изобретения

Питательная двухфазная среда для выделения трихомонад, содержащая твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой в количестве 5 мл, и жидкую фазу, содержащую питательную среду 199, в количестве 5 мл с раствором натриевой соли бензил-пенициллина 10000-30000 ЕД/мл и раствором стрептомицина 10000-30000 мкг/мл - 1 мл соответственно.

Изобретение "ПИТАТЕЛЬНАЯ ДВУХФАЗНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ТРИХОМОНАД" (Бойко Оксана Витальевна, Николаев Александр Аркадьевич, Бойко Андрей Виталиевич, Плосконос Мария Вячеславовна, Луцкий Дмитрий Леонидович, Гудинская Наталья Игоревна) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога