Способ определения РНК вирусов гриппа А подтипов H1N1 и H7N9 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, совмещенный с методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ)

Название	Способ определения РНК вирусов гриппа А подтипов H1N1 и H7N9 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, совмещенный с методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ)
Разработчик (Авторы)	Буряченко С.В., Стегний Б.Т.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	121839
Дата регистрации	2020

Описание изобретения

Способ определения вируса гриппа А  подтипа H1N1 и H7N9, в котором проводят полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с РНК, совмещенный с методом полиморфизмов длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) на три гена, анализ реакционной смеси с помощью электрофореза в агарозном геле и выявление РНК штаммов вирусов гриппа А по результатам анализа, который отличается тем, что как праймеры для осуществления совмещенной реакции обратной транскрипции и амплификации в ПЦР с методом ПДРФ используют олигонуклеотиды с 20 звеньями, причем первую ПЦР проводят с олигонуклеотидами с 20 звеньями HA5, ACACCAGCCTCCCATTTCAG и CCCCCTCAATAAAGCCAGCA, HA10, который включает праймеры  GCCGCAAATGCAGACACATT и GCTGCCGTCACACCTCTATT; вторую ПЦР – с праймерами, специфическими к участку гена нейраминидазы, матрицей для второй реакции является одноцепочечная РНК вируса гриппа, а затравкой – праймеры, которые состоят из 20 звеньев: NA 1, CAGGAGCCCATATCGAACCC и CTTTGGGTCGCCCTCTGATT, для гена NA8 – праймеры TGCAGGGATAACTGGCATGG и GCTCCCGCTAGTCCAGATTG; и третью ПЦР с праймерами, специфическими к участку гена нуклеопротеида NP5 вируса гриппа А, матрицей для третьей реакции является однонитевая РНК вируса гриппа, а затравкой – праймеры, которые состоят из 20 звеньев: GTGGTCAGCCTGATGAGCC GGGTTCGTTGCCTTTTCGTC, комплементарные не менее чем на 95% гена гемагглютинина, нейраминидазы и нуклеопротеида; определение в анализируемых образцах продуктов ПЦР (фрагментов РНК) размером 958 нуклеотидных пар (н.п.) для праймеров, специфических H1N1, 966 п.н. для праймеров НА5, специфических H7N9; для HA10:416 п.н. для H1N1 и 411 для H7N9; для NA1 (H1N1) 845 п.н. и 848 для H7N9, для NA8 (H1N1) 450 п.н. и 477 для H7N9, для NP5 (H1N1) 166 и 163, 166 для H7N9, при использовании праймеров, специфических к генам гемаглютинина, нейраминидазы и нуклеопротеида, что свидетельствует про наличие в начальном материале РНК вирусов, при этом идентификация штамма H1N1, образцы которого образуют при ПДРФ-анализе с использованием подобраных рестриктаз к гену NP уникальные продукты размерами 49-50, 348-350, 592-599 п.н., другие – фрагмент амплификации размерами 21, 39, 201-203, 471-480 п.н., идентичные продукты ПДРФ-анализа с использованием подобранных рестриктаз с штамом H7N9.

Изобретение "Способ определения РНК вирусов гриппа А подтипов H1N1 и H7N9 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, совмещенный с методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ)" (Буряченко С.В., Стегний Б.Т.) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога