СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ

Название	СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ
Разработчик (Авторы)	Роменский Роман Викторович, Роменская Наталья Васильевна, Капустин Роман Филиппович
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2305844
Дата регистрации	20.12.2005
Правообладатель	ФГОУ ВПО "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия"
Область применения (класс МПК)	G01N 33/68 (2006.01)
Медаль имени А.Нобеля

Описание изобретения

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной медицине и может быть использовано в нормальной и патологической физиологии, клинической диагностике и терапии.

Существуют различные способы оценки функционального состояния печени [RU 2194280 C2, 7 G01N 33/48, 10.12.2002; RU 2089914 C1, 6 G01N 33/68, 09.10.1997], но ни один из них не может быть использован для оценки функционального состояния печени новорожденного молодняка крупного рогатого скота.

Наиболее близким к заявляемому является способ, используемый для диагностики гепатозов у коров [RU 2029304 С1, 6 G01N 33/04, 02.20.1995]. Однако он не может быть использован для оценки состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота, так как может быть применен лишь для диагностики гепатозов у коров. Сущность его в том, что функциональное состояние печени оценивают по содержанию мочевины в молоке и при соответствующем показателе до 4,06 ммоль/л и наличии клинических признаков - гипотонии желудков, увеличении области печеночного притупления (задняя граница печени за тринадцатым ребром), болезненность печени при перкуссии - ставят диагноз на гепатоз. Предлагаемый нами способ имеет ряд конструктивных отличий, позволяющих минимизировать риск развития осложнений и сделать возможным оценку функционального состояния печени новорожденного молодняка крупного рогатого скота.

Проявления различных заболеваний печени несут в себе черты неспецифичности, поэтому только совокупность исследований позволяет решать вопросы этиологии и нозологической принадлежности того или иного патологического процесса, активности его и функционального состояния печени.

В ветеринарной практике исследование печени в основном производят общими методами, лишь при необходимости прибегая к специальным. Из общих методов чаще используют осмотр, пальпацию и перкуссию.

Лабораторная диагностика использует множество различных показателей, характеризующих функциональное состояние печени, но не все из них удобно использовать при оценке степени повреждения и прогнозировании исхода заболеваний гепатобилиарной системы у новорожденного молодняка крупного рогатого скота. Организм новорожденного характеризуется незрелостью многих органов и систем поддержания гомеостаза, что затрудняет использование рутинных средств клинической и лабораторной диагностики, при этом интерпретация большинства лабораторных тестов имеет свои особенности.

Проведенные нами исследования установили определенную закономерность изменений со стороны белкового обмена у телят первых двух недель жизни при нарушении функционального состояния печени. Протеиновый обмен у новорожденных характеризуется преимущественным катаболизмом колострально полученных белков и невысоким уровнем синтеза собственных, при этом их качественный состав не отличается разнообразием за исключением гамма-глобулиновой фракции, он преимущественно представлен белками печеночного происхождения. Было показано, что телята различаются в том числе и по динамике альфа-глобулиновой фракции белков. Особое место в ней принадлежит альфа-1-антитрипсину. Образуясь в печени (составляет 80-90% всех альфа-1-глобулинов), он является основным ингибитором эластазы лейкоцитов и других катепсинов (тканевых протеаз). При снижении его синтеза, что часто встречается у недоношенного и физиологически незрелого молодняка, нарушаются репаративные процессы в печени и легких. Эти явления зачастую осложняются тяжело протекающими пневмониями и заболеваниями печени новорожденных, прогрессирующими до цирроза.

Для ветеринарной практики существенную проблему представляет определение количества этого сывороточного компонента, так как процедура требует наличия видоспецифических сывороток. Нами предложено оценивать содержание альфа-1-антитрипсина в сыворотке крови новорожденных телят по косвенным показателям, опираясь на положение о том, что до двухнедельного возраста альфа-2-фракция глобулинов не выделяется при фракционировании белков, что обусловлено незрелостью иммунной системы. Следовательно, электрофоретически определяемая фракция альфа-глобулинов состоит из компонентов альфа-1.

Задача предлагаемого изобретения - решение проблемы оценки функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что определяют количество альфа-глобулинов, альбуминов, бета-глобулинов крови и по формуле определяют диагностический критерий - коэффициент функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП):

,

где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов, при величине коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП)≥2 функциональное состояние печени считают удовлетворительным (животное нормотрофик), при величине коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП)<0,2 констатируют функциональную недостаточность печени (животное гипотрофик).

Пример выполнения. Способ использован на 47 телятах черно-пестрой породы, принадлежащих учхозу БелГСХА «Центральное». На момент проведения опыта все животные содержались в индивидуальных клетках, кормление и содержание типичные для данного хозяйства. Все исследования проводились в зимне-весенний периоды (1998/1999, 1999/2000 и 2000/2001 гг.), в период наибольшего напряжения гомеостатических систем организма животных. Клинические, гематологические и биохимические исследования телят проводись через каждые 3-4 суток, начиная с рождения до двухнедельного возраста. Клинические исследования телят проводили по общепринятой схеме с описанием всех изменений в курационных листах. Материал для лабораторного исследования во всех случаях отбирали в период физиологического покоя, до утреннего кормления. Лабораторные исследования крови проводились не позже 5-6 часов после отбора материала. В наших исследованиях мы разделили молодняк на две группы: клинически здоровых телят (нормотрофиков) и гипотрофиков (с нарушением функционального состояния печени).

Данные, полученные в результате, показывают, что за отчетный период из 47 телят 17 (36,2%) рождены с выраженными нарушениями клинических показателей. Так, масса тела у гипотрофичного молодняка при рождении составляла 24,5±0,89 кг против 27,4±0,66 кг у клинически здоровых телят (р<0,02). Низкая масса тела при рождении сопровождалась следующими изменениями: кожа сухая, легко собирающаяся в складки; подкожный жировой слой не развит; шерсть тусклая, плохо удерживается при механическом воздействии; глазные яблоки запавшие; видимые слизистые оболочки цианотичны; дыхание неравномерное (частота 42±2 в минуту), поверхностное; сердечный толчок усилен (пульс 120±10 в минуту, слабого наполнения).

Данные лабораторных тестов по возрастным промежуткам представлены в таблицах 1-3, причем в результате молодняк был разделен на две группы: клинически здоровых телят (нормотрофиков) (фиг.1. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 20, окуляр 7) и гипотрофиков (с нарушением функционального состояния печени). Установлено, что у животных, имевших симптомокомплекс гипотрофии и биохимические изменения, характерные для функциональной незрелости печени (гипо- и диспротеинемия, при критически низком уровне альфа-глобулиновой фракции, смотрите таблицы 1-3), отмечались также нарушения архитектоники печеночной ткани. В основном эти изменения сводились к недосформированности печеночных балок, резкому снижению (или исчезновению) количества двуядерных гепатоцитов и наличию полей деструктивно измененных клеток с явлениями кариолизиса и макрофагальной реакцией. Также отмечены: ядерный полиморфизм, наличие гиперхромных ядер в гепатоцитах, очаги микро- и макронекроза, цитолиз и кариолизис в гепатоцитах, явления кариопикноза. (фиг.2. Очаг некроза. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 40, окуляр 7). У одного из телят обнаружены изменения, характерные для начальной стадии цирротического перерождения органа (фиг.3. Обширный некроз в паренхиме, явления гиалинизации некротических масс, лимфоидная инфильтрация очага, цитолиз и кариолизис в гепатоцитах, явления кариопикноза. Печень теленка. Окраска гематоксилин и эозин. Объектив 40, окуляр 7). Причем степень этих изменений была тем выше, чем меньше был К_ФСП.

Таблица 1
Биохимические показатели крови новорожденных телят (2-4 суток)
Показатель	Гипотрофики	Нормотрофики
Общий белок, г/л	49,7±1,1	61,4±1,3
Альбумины, г/л	31,0±0,8	26,3±0,9
Альфа-глобулины, г/л	5,9±0,8	9,5±0,95
Бета-глобулины, г/л	6,9±1,3	7,4±0,6
Гамма-глобулины, г/л	5,5±0,8	18,5±1,3
Альбумины/глобулины	1,98±0,2	0,79±0,05
КФСП	0,13±0,01	0,22±0,02
Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2	0,75±0,03	0,56±0,03
АлАт, мкмоль/мл/час	0,26±0,21	0,12±0,08
АсАт, мкмоль/мл/час	0,36±0,1	0,50±0,09
Примечание. КФСП определяли следующим образом: , где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное гипотрофик (функциональная недостаточность печени). , где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное нормотрофик (функциональное состояние печени удовлетворительное).

Таблица 2
Биохимические показатели крови новорожденных телят (6-8 суток)
Показатель	Гипотрофики	Нормотрофики
Общий белок, г/л	52,2±1,7	61,4±1,0
Альбумины, г/л	34,5±0,6	30,8±1,2
Альфа-глобулины, г/л	6,3±0,9	9,5±0,6
Бета-глобулины, г/л	4,9±1,1	6,1±0,7
Гамма-глобулины, г/л	6,7±1,5	15,5±1,2
Альбумины/глобулины	2,16±0,22	1,05±0,07
КФСП	0,13±0,02	0,21±0,01
Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2	0,66±0,05	0,5±0,03
АлАт, мкмоль/мл/час	0,23±0,15	0,1±0,04
АсАт, мкмоль/мл/час	0,26±0,12	0,3±0,11
Примечание. КФСП определяли следующим образом: , где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное гипотрофик (функциональная недостаточность печени). , где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное нормотрофик (функциональное состояние печени удовлетворительное).

Таблица 3
Биохимические показатели крови новорожденных телят (10-12 суток)
Показатель	Гипотрофики	Нормотрофики
Общий белок, г/л	52,2±1,2	61,0±1,5
Альбумины, г/л	35,3±1,1	32,9±1,3
Альфа-глобулины, г/л	7,2±0,5	10,4±2,1
Бета-глобулины, г/л	3,9±0,8	3,9±0,6
Гамма-глобулины, г/л	5,6±0,8	14,2±1,6
Альбумины/глобулины	2,26±0,22	1,24±0,12
КФСП	0,15±0,01	0,22±0,02
Проба Вельтмана, мл 0,5% раствора CaCl2	0,56±0,03	0,45±0,03
АлАт, мкмоль/мл/час	0,06±0,03	0,1±0,07
АсАт, мкмоль/мл/час	0,23±0,09	0,36±0,1
Примечание. КФСП определяли следующим образом: , где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное гипотрофик (функциональная недостаточность печени).  где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов. Следовательно, животное нормотрофик (функциональное состояние печени удовлетворительное).

Таким образом, способ позволяет расширить спектр тестов клинической гепатологии и повысить эффективность диагностических мероприятий, а также способствует прогнозированию исхода патологии гепатобилиарной системы у новорожденного молодняка крупного рогатого скота. Способ прост в использовании и не требует специальных навыков персонала, может быть использован при проведении научных исследований по проблемам неонатальной и обменной патологии.

Формула изобретения

Способ оценки функционального состояния печени, включающий постановку функционального теста, отличающийся тем, что определяют количество альфа-глобулинов, альбуминов, бета-глобулинов крови в первые 14 сут. после рождения и по формуле определяют диагностический критерий - коэффициент функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП):

,

где А - количество альфа-глобулинов, В - количество альбуминов, С - количество бета-глобулинов, при величине коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП)≥0,2 функциональное состояние печени считают удовлетворительным, при величине коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота (К_ФСП)<0,2 констатируют функциональную недостаточность печени.

Изобретение "СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ" (Роменский Роман Викторович, Роменская Наталья Васильевна, Капустин Роман Филиппович) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога