Название | Способ получения антигена типа Азия-1 для серологической реакции при ящуре животных |
---|---|
Разработчик (Авторы) | Майхин К.Т., Абишов А.А., Мададов М.Ф. |
Вид объекта патентного права | Изобретение |
Регистрационный номер | 17612 |
Дата регистрации | 29.04.2005 |
Область применения (класс МПК) | A61K 39/135, C12N 7/00 // (C12N 7/00, C12R 1:93) (7) |
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения диагностических препаратов и может найти применение в ветеринарной практике для диагностики ящура и выявления антител в сыворотке крови вакцинированных, переболевших или подозреваемых в переболевании животных ящуром. Способ получения антигена типа Азия-1 для серологической реакции при ящуре животных включает адаптацию вируса ящура к организму крольчат, забивание больных крольчат, измельчение в мясорубке, затем в микроизмельчителе, приготовление суспензии на физиологическом растворе, экстрагирование, замораживание и оттаивание, концентрирование и инактивирование, центрифугирование и получение надосадочной жидкости, при этом используют штамм вируса ящура типа Азия-1 № 13/КазНИВИ, который адаптируют к организму 1-2 суточных крольчат, забивают крольчат в период выраженной клиники ящура, после измельчения тушек готовят 33 % суспензию на физиологическом растворе, экстрагируют при температуре 1 8-20 °С в течение 2 ч, после чего дважды замораживают при температуре -20 °С в течение 24 ч и оттаивают при комнатной температуре, затем суспензию центрифугируют при 5000 об/мин, в течение 20 мин, надосадочную жидкость сливают в стерильные флаконы, эмульгируют 5 %-ным хлороформом в течение 20 мин, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин, инактивируют 0,03 %-ным раствором формальдегида при температуре 37 °С в течение 24 ч, затем в суспензию добавляют стерильный 50 % раствор ПЭГ с мол. весом 6000 до конечной концентрации 8 %, полученную смесь тщательно перемешивают, выдерживают 18 ч при температуре 6 °С, суспензию центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин, затем надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в физиологическом растворе в соотношении 1:50, 1:100 и добавляют защитную среду, включающую 4 %-ный раствор пептона, 3 %-ный раствор сахарозы и 1 %-ный раствор желатина, после чего тщательно перемешивают, разливают в стерильные ампулы по 1 мл и подвергают сублимационной сушке. Предложенный способ обеспечивает получение высокоактивного антигена со стабильными свойствами для применения его в серологических реакциях при ящуре.