L международная выставка-презентация
научных, технических, учебно-методических и литературно-художественных изданий
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА БОЛЬНЫХ РОЗАЦЕА
| Название | СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА БОЛЬНЫХ РОЗАЦЕА |
|---|---|
| Разработчик (Авторы) | Балтабаев Мир-Али Курбан-Алиевич, Балтабаев Алиджон Мир-Алиевич, Балтабаева Лайло Мир-Алиевна |
| Вид объекта патентного права | Изобретение |
| Регистрационный номер | 2751656 |
| Дата регистрации | 15.07.2021 |
| Правообладатель | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кыргызско-Российский Славянский университет (КРСУ) |
| Область применения (класс МПК) | C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) |
Описание изобретения
Способ относится к биотехнологии, а именно к дерматологии, может быть использован в диагностике функционального состояния желудочно-кишечного тракта при различных клинических формах розацеа, включающий клиническое обследование больного, сбор анамнестических данных и данных изучения активности в периферической крови уреазного теста и морфологического исследования слизистой желудка и кишечника на наличие Н. Pylori, причем исследование функционального состояния желудочно-кишечного тракта проводится методом ПЦР анализа в режиме реального времени гена полиморфизма МСМ6 - лактазы-флорингидролазы в периферической крови больных и при наличии генотипов С/С и С/Т диагностируют функциональную патологию желудочно-кишечного тракта больных розацеа. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано в дополнительной диагностике функциональной патологии желудочно-кишечного тракта у больных розацеа.
Известен способ диагностики желудочно-кишечного тракта путем изучения клинических, анамнестических и катамнестических данных больных розацеа [К. Вольф, Л.А. Голдсмит, С.И. Кац, Б.А. Джилкрест, Э.С. Паллер, Д. Дж, Леффель. Дерматология Фитцпатрика в клинической практике. Москва 2012, Издательство «Бином» Том 1. с. 769-775].
Недостатком этого способа является то, что клинические, анамнестические и катамнестические данные являются общими критериями диагностики болезни и не позволяют прогнозировать течение дерматоза.
Известен способ диагностики функционального состояния желудочно-кишечного тракта у больных розацеа на основе уреазного теста и морфологического изучения состояния слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки на предмет содержания Н.pylori [В.В. Карлова. Эффективность лечения acne rosacea на фоне патологии желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori. Альманах клинической медицины.2007, №15, с. 162-185]. Указанный метод трудоемкий, необходим доступ к слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки с помощью фиброгастроскопии и взятием биоптата. Не все больные согласны на проведение процедуры фиброгастроскопии, которая в то же время требует подготовки больного в связи инвазивным методом исследования [В.В. Карлова. Эффективность лечения acne rosacea на фоне патологии желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori. Альманах клинической медицины. 2007, №15, с. 162-185].
Задачей изобретения является повышение эффективности диагностики функциональной патологии желудочно-кишечного тракта больных, страдающих различными клиническими формами розацеа.
Задача решается способом диагностики функционального состояния желудочно-кишечного тракта у больных розацеа, включающий клиническое обследование больного, сбор анамнестических данных и данных изучения. Способ лабораторной диагностики функциональной патологии желудочно-кишечного тракта у больных розацеа, заключающийся в исследовании периферической крови больных, набором реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями обмена фермента лактозы, методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (генетика метаболизма лактозы) с анализом кривых плавления предоставленной фирмой ООО «ДНК-Технология» РФ.
Технология ПЦР с анализом кривых плавления дает возможность идентифицировать фрагменты ДНК путем детекции изменений в уровне флуоресценции комплекса фрагмент-проба (меченный флуорофором олигонуклеотидный зонд) на этапе его денатурации и последующего построения графика кривой плавления.
Технология включает следующие этапы:
а) Амплификация искомой последовательности ДНК;
б) Гибридизация ампликонов с олигонуклеотидами (пробами), меченными флуорофорами;
в) Образование комплементарных и частично комплементарных дуплексов;
г) Плавление (денатурация) дуплексов;
д) Детекция флуоресценции с последующим построением и анализом кривых плавления.
Для определения нуклеотидной последовательности, образовавшейся в процессе амплификации, используют метод примыкающих проб (kissing probes или резонансный перенос энергии).
В его основе лежит использование двух типов олигонуклеотидов (проб), гибридизующихся на матрицу при низкой температуре в непосредственной близости друг от друга. Один из олигонуклеотидов метят флуоресцентным донором, другой - акцептором (гасителем). Идентификация нуклеотидной последовательности образца осуществляется в процессе плавления дуплексов (результат гибридизации фрагментов ДНК и олигонуклеотидных зондов), которое происходит при последовательном увеличении температуры реакционной смеси.
Преимуществом данного подхода является использование специфических флуорофоров, снижающих риск детектирования неспецифических продуктов амплификации, как при использовании интеркалирующих красителей.
Для проведения анализа необходимы следующие расходные материалы и оборудование:
- микропробирки (или микропробирки в стрипах) объемом 0,2 мл для ПЦР-анализа, адаптированные для работы с термоциклером в режиме реального времени;
- штатив и насадка на микроцентрифугу (вортекс) для стрипованного пластика.
Оборудование, необходимое для проведения анализа: Набор реагентов предназначен для использования в лабораториях, оснащенных детектирующими мплификаторами для ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (приборы сеии «ДТ» производства ООО «НПО ДНК-Технология»): «ДТлайт», «ДТпрайм» и «ДТ-96» (для «ДТ-322» Приборы серии «ДТ» оснащены специально разработанным программным обеспечением, поддерживающим автоматическую обработку данных и выдачу результатов исследования в удобной для интерпретации форме.
Проведено исследование 39 больных, страдающих различными клиническими формами розацеа. У всех пациентов (100%) исследование периферической крови методом ПЦР анализа показал результаты ферментативной недостаточности лактаза-флорингидролазы [С/Т и С/С]. У 31 пациента выявлен генотип С/С, у 8 больных розацеа установлен генотип С/Т. Таким образом, выявление в периферической крови у всех больных розацеа генотипов С/Т и С/С указывало на наличие функциональной недостаточности ферментной системы желудочно-кишечного тракта - лактазы-флорингидролазы гена МСМ6, способной к расщеплению дисахарида - лактозы, являющейся одной и патогенетических звеньев в развитии воспалительного процесса при указанном дерматозе.
Таким образом, исследование генотипов МСМ6 - лактаза-флорингидролазы у больных различными клиническими формами розацеа является эффективным методом диагностики функциональной патологии желудочно-кишечного тракта.
Формула изобретения
Способ диагностики функционального состояния желудочно-кишечного тракта у больных розацеа, включающий клиническое обследование больного, сбор анамнестических данных и данных изучения уреазного теста и морфологического исследования слизистой желудка и кишечника на наличие Н. Pylori и отличающийся тем, что с целью оценки функционального состояния желудочно-кишечного тракта больных различными клиническими формами розацеа в периферической крови методом ПЦР анализа в режиме реального времени исследуется ген полиморфизма МСМ6 - лактаза-флоригидролаза и при наличии генотипов С/Т и С/С диагностируют функциональную патологию желудочно-кишечного тракта больных розацеа.
Медаль Альфреда Нобеля