Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, обладающего церебропротекторной активностью

Название	Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, обладающего церебропротекторной активностью
Разработчик (Авторы)	Блинова Екатерина Валериевна, Громова Ирина Александровна, Блинов Дмитрий Сергеевич, Скачилова София Яковлевна, Семелева Елена Владимировна, Гераськина Мария Михайловна
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2690506
Дата регистрации	04.06.2019
Правообладатель	Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва"
Область применения (класс МПК)	A61K 31/198 (2006.01) A61K 31/167 (2006.01) C07C 227/00 (2006.01) A61P 9/10 (2006.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к области медицины, где может найти применение в медицинской практике для профилактики и лечения ишемических нарушений мозгового кровообращения, транзиторных ишемических атак и может быть использовано для создания отечественного лекарственного средства для терапии ишемического инсульта.

Известно соединение 3-(2-метоксиэтил)-5-пропан-2-ил-2,6-диметил-4-(3-нитрофенил)-1,4-дигидропиридина 3,5-дикарбоксилат под названием нимодипин, проявляющее церебропротекторное и нейротрофическое действие при ишемических нарушениях мозгового кровообращения в клинической практике (Gelmers H.J. The effects of nimodipine on the clinical course of patients with acute ischemic stroke // Acta Neurol. Scand. - 1984. - Vol. 69, No. 4. - P. 232-239) и нейропротекторное действие в эксперименте на животных (Bielenberg G.W., Beck Т., Sauer D., Burniol M., Krieglstein J. Effect of cerebroprotective agents on cerebral blood flow and on postischemic energy metabolism in the rat brain // J. Cereb. Blood. Flow. Metab. - 1987. - Vol. 7. - P. 480-488).

Недостатками известного решения являются высокая токсичность, невысокая продолжительность терапевтического действия и большой спектр вызываемых им побочных эффектов, среди которых наиболее часто наблюдаются сердечные аритмии, снижение артериального давления, брадикардия, диспепсические расстройства.

Известны производные 2-диэтиламино-2¹, 6¹-диметилфенилацетамида с антиаритмической активностью. Новые производные представляют собой новые соли лидокаина: L-аргинат, L-глутаминат, N-ацетил-L-глутаминат, 2-аминопропионат, аминоацетат, сукцинат, N-ацетилцистеинат и β-фенил-α-аминопропионат, более эффективные и безопасные по сравнению с гидрохлоридом лидокаина (RU 2223263, МПК С07С 237/04, С07С 229/06, С07С 229/24, опубл. 10.02.2004).

Недостатками является отсутствие церебропротекторного действия при ишемическом и дистрофическом поражении головного мозга, слабо выраженные антигипоксические свойства.

Технический результат заключается в создании производного 2,6-диметилфенилацетамида - 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида 2-ацетаминоэтансульфоноат, которое обладает высокой церебропротекторной активностью, позволяет снизить острую токсичность и увеличить продолжительность фармакологического действия при ишемическом нарушении мозгового кровообращения.

Сущность изобретения заключается в том, в способе получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, к 20 г очищенного 2-диэтиламино-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида приливают 200 мл воды очищенной и добавляют 14,33 г N-ацетил-2-аминоэтансульфоновой кислоты, смесь перемешивают на водяной бане при 55-60°C в течение 30-40 мин, полученный раствор фильтруют, воду отгоняют. Остаток сушат до постоянного веса и просеивают. Получают 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида 2-ацетаминоэтансульфоноат общей формулы (1):

обладающего церебропротекторной активностью.

Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) заключается в следующем.

Пример 1. Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1)

В реактор вместимостью 2 л, снабженный мешалкой, обратным холодильником и термометром, загружают 20 г очищенного 2-диэтиламино-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида, приливают 200 мл воды очищенной и добавляют 14,33 г N-ацетил-2-аминоэтансульфоновой кислоты. Включают мешалку, массу нагревают на водяной бане до температуры 55-60°C и перемешивают при указанной температуре в течение 30-40 мин. Водный раствор субстанции общей формулы (1) фильтруют через фильтр Шота №4. Маточный раствор после фильтрации передают в аппарат для отгонки воды. Отгонку воды проводят в аппарате при температуре 30-35°C и вакууме 30-40 мм рт.ст. После завершения отгонки воды остаток кристаллизуется. Его переносят в вакуум-сушильный шкаф и сушат в вакууме 30-40 мм рт.ст. при температуре 30-35°C до постоянного веса. Высушенный остаток просеивают в сухом помещении через сито №32 (размер отверстий 200 мкм). Получают 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида 2-ацетаминоэтансульфоноат, белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, гигроскопичный.

Выход 30,5 г (89,4%).

В литературе не описаны фармацевтические композиции, готовые лекарственные формы, содержащие производное 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1).

Исследования фармакологической активности производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) представлены в нижеследующих примерах.

Пример 2. Острая токсичность производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) и прототипа

Острая токсичность производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) изучена в опытах на белых беспородных мышах (40 особей обоего пола весом 19-22 г, полученных из питомника филиала «Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России) при внутривенном введении растворов производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) и прототипа в объеме 0,4-0,6 мл в возрастающих концентрациях.

Показатель ЛД₅₀ рассчитывали методом Личфилда-Уилкоксона (Е.В. Арзамасцев, И.В. Березовская, О.В. Верстакова и др. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия лекарственных средств / Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. 1. - М.: Гриф и К, 2012. - С. 25-35; Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. - М.: Издательский дом «Русский врач». - 2003. - С. 20-24.). Результаты исследования производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1), а также прототипа нимодипина, представлены в табл. 1.

Из предлагаемых в табл. 1 данных хорошо видно, что заявленное соединение более, чем в шесть раз менее токсично, нежели прототип нимодипин при внутривенном введении. Причем, производное 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) относится к классу 3 (умеренно токсичные вещества) классификации токсичности химических веществ в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 (Березовская И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения // Хим.-фарм. журнал. - 2003. - Т. 37, №3. - С. 32-34).

Пример 3. Церебропротекторная активность производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) на модели интралюминальной окклюзии / реперфузии средней мозговой артерии у крыс

Церебропротекторная активность производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) изучена в опытах на белых нелинейных крысах (64 особей-самцов весом 350-400 г, полученных из питомника филиала «Андреевка» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России) при внутривенном введении водных растворов производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) и нимодипина (прототип) в объеме 0,8-1,0 мл в возрастающих дозах.

Фокальную ишемию головного мозга воспроизводили путем интралюминальной окклюзии средней мозговой артерии слева с ее последующей реперфузией (Longa E.Z., Weinstein P.R., Carlson S., Cummins R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats // Stroke; a journal of cerebral circulation. - 1989. - Vol. 20, No. 1. - P. 84-91).

Результаты исследования церебропротекторного действия производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) на модели интралюминальной окклюзии / реперфузии средней мозговой артерии представлены в табл. 2, 3. Из представленных в табл. 2 данных хорошо видно, что внутривенное введении производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) в дозе 10 мг/кг за 5-10 мин до воспроизведения ишемии мозга приводит к формированию более мягкого сенсомоторного дефицита, измеряемого на 7 сут опыта, чем внутривенное введение прототипа в сравнимой дозе, что может свидетельствовать о более высокой активности производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) при ишемически-реперфузионном синдроме. При проведении морфологического исследования головного мозга крыс на 7 и 14 сут (по 50% животных из каждой серии), перенесших окклюзию средней мозговой артерии с ее последующей реперфузией, установлено (табл. 3), что внутривенное введение производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) сопровождается снижением объема поражения тканей мозга при сравнении с прототипом. Наименьший размер некроза установлен при профилактическом введении производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) как на 7, так и на 14 сут.

Таким образом, в отличие от прототипа, производное 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) отличается большей силой церебропротекторного действия при обратимой окклюзии средней мозговой артерии у крыс с ее последующей реперфузией.

Пример 4. Церебропротекторная активность производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) на модели необратимой перевязки средней мозговой артерии у крыс

Экспериментальная модель воспроизводилась у наркотизированных уретаном (380-420 мг/кг внутрибрюшинно) половозрелых нелинейных крыс-самцов весом 350-400 г (24 особи), полученных из питомника филиала «Андреевка» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России. Изучение церебропротекторной активности производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) и нимодипина (прототип) у животных проводили по методу Bederson и соавт. (Bederson J., Pitts L., Tsuji M. et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurological examination // Stroke. - 1986. - Vol. 17. - P. 472-476).

Результаты исследования церебропротекторной активности приведены в табл. 4 и 5.

Как видно в табл. 4, внутривенное введение производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) в профилактическом режиме приводит к формированию более мягкого неврологического дефицита, что может свидетельствовать о более легком поражении головного мозга при перевязке мозговой артерии. При этом, следует обратить внимание, что в отличие от прототипа, на фоне введения производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) отмечалась положительная динамика симптомов к 14-м суткам наблюдения, по сравнению с 7 сут опыта.

При оценке глубины и объема поражение ипсилатерального полушария головного мозга крысы при ишемическом процессе были получены следующие результаты (табл. 5). Необратимая перевязка средней мозговой артерии приводила к поражению трех четвертей ткани полушария головного мозга. Внутривенное введение производного 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) в профилактическом режиме сокращало объем мозгового некроза, при этом производное 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) было более эффективным, чем прототип (нимодипин).

Таким образом, по силе и длительности церебропротекторного эффекта на модели необратимой перевязки средней мозговой артерии производное 2,6-диметилфенилацетамида общей формулы (1) превосходит прототип.

Исследования проведены в соответствии с этическими требованиями к работе с экспериментальными животными («Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР №755 от 12.08.1987 г.), Федеральный закон «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г., Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 г. №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики», ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами» (введен в действие 01.07.2016 г.) и одобрены Локальным этическим комитетом.

По сравнению с известным решением применение производного 2,6-диметилфенилацетамида - 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида 2-ацетаминоэтансульфоноата общей формулы (1) позволяет снизить острую токсичность, увеличить силу и продолжительность церебропротекторного эффекта при интралюминальной окклюзии средней мозговой артерии с ее последующей реперфузией и при ишемии головного мозга, вызванной необратимой перевязкой мозговой артерии.

Формула изобретения

Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, обладающего церебропротекторной активностью, заключающийся в том, что к 20 г очищенного 2-диэтиламино-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида приливают 200 мл воды очищенной и добавляют 14,33 г N-ацетил-2-аминоэтансульфоновой кислоты, смесь перемешивают на водяной бане при 55-60°С в течение 30-40 мин, полученный раствор фильтруют, воду отгоняют, остаток сушат до постоянного веса и просеивают, после чего получают 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида 2-ацетаминоэтансульфоноат общей формулы (1)

(1)

Изобретение "Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, обладающего церебропротекторной активностью" (Блинова Екатерина Валериевна, Громова Ирина Александровна, Блинов Дмитрий Сергеевич, Скачилова София Яковлевна, Семелева Елена Владимировна, Гераськина Мария Михайловна) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога