2-(Диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат, обладающий пролонгированной противоаритмической активностью, фармацевтическая композиция

Название	2-(Диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат, обладающий пролонгированной противоаритмической активностью, фармацевтическая композиция
Разработчик (Авторы)	Скачилова София Яковлевна, Коротоножкин Алексей Викторович, Алешина Валентина Алексеевна, Гирева Наталия Николаевна, Блинова Екатерина Валериевна, Семелева Елена Владимировна, Блинов Дмитрий Сергеевич, Желтухин Николай Константинович, Шилова Елена Владимировна
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2697717
Дата регистрации	19.08.2019
Правообладатель	Акционерное общество "Всесоюзный научный центр по безопасности биологически активных веществ" АО "ВНЦ БАВ"
Область применения (класс МПК)	A61K 31/198 (2006.01) A61K 31/167 (2006.01) A61P 9/06 (2006.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к медицине и может найти применение в медицинской практике в качестве лекарственного средства, обладающего пролонгированным действием и пригодного для коррекции нарушений ритма сердечной деятельности, в том числе и ишемической природы.

2-(Диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат, обладающий пролонгированной противоаритмической активностью (соединение 1), фармацевтическая композиция.

Уровень техники

Проблема профилактики и лечения аритмии и ишемической болезни сердца весьма актуальна, поскольку смертность больных от заболеваний сердечнососудистой системы, занимает первое место в мире среди летальных исходов от других болезней.

Широко применяемый в медицине противоаритмический препарат лидокаин, находится в Перечне жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств РФ (утвержден распоряжением Правительства Российской Федерации от 7 декабря 2017 г. на 2018 г. ).

Однако известно, что лидокаин обладает существенными недостатками: короткая продолжительность действия, вызывает судороги, снижение артериального давления, кардиогенный шок, брадикардию, угнетает дыхание и др. (Энциклопедия лекарств РЛС 2017 г.; М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М., ООО "Новая волна", 2013, с. 311-312).

Ближайшим аналогом заявляемого соединения 1 является фармацевтическая композиция с пролонгированной антиаритмической активностью, содержащая бис[2-(диэтиламино)]-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат, L-глутаминовую кислоту, 2-аминоэтансульфокислоту и вспомогательные вещества. Технический результат обеспечивает пролонгированное антиаритмическое действие и стабильность лекарственной формы (таблеток, капсул для перорального применения или раствора для инъекций), патент РФ 2538674.

Заявляемая фармацевтическая композиция на основе соединения 1 (2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат) отличается от аналога как фармацевтической субстанцией, так и составом вспомогательных веществ, обеспечивающих возможность промышленного производства лекарственного средства, стабильность фармацевтической композиции и физиологическую совместимость с биологическими средами.

Раскрытие изобретения.

Целью изобретения является создание пролонгированного антиаритмического средства в виде фармацевтической композиции, содержащей соединение 1 (2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат).

Технический результат достигается разработкой синтеза соединения 1 (фармацевтическая субстанция), выявленными новыми свойствами, а именно пролонгированным действием, увеличением широты терапевтического действия, снижением острой токсичности, созданием на основе этого соединения фармацевтической композиции и лекарственного средства.

Нами усовершенствован метод очистки 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида, при котором целевой продукт не содержит

примесь высокотоксичного 2,6-диметиланилина.

Нами предложена фармацевтическая композиция; лекарственная форма в виде раствора для инъекций.

С учетом физико-химических свойств субстанции проведены исследования по выбору вспомогательных веществ, обеспечивающих создание раствора для инъекций.

Лекарственная форма для инъекций, как правило, представляет собой водные растворы активного вещества с добавлением определенных количеств вспомогательных веществ, обеспечивающих стабильность лекарственной формы при хранении.

Общим требованием ко всем лекарственным средствам для инъекций являются:

- высокая чистота и апирогенность используемых растворителей и других жидких сред;

- высокое качество применяемых фармакопейных субстанций и вспомогательных веществ;

- стерильность;

- стабильность;

- отсутствие механических примесей.

Все лекарственные субстанции и вспомогательные вещества должны быть разрешены к медицинскому применению и удовлетворять требованиям НД.

Кислоты янтарная и гидроксиянтарная обладают антиоксидантными свойствами и способствуют стабилизации активной фармацевтической субстанции (ФС).

Магния сульфат и натрия хлорид являются электролитами и выбраны в качестве веществ для осмоляльности растворов.

Антиаритмическое действие Mg2+ обусловлено снижением возбудимости кардиомиоцитов, восстановлением ионного равновесия, стабилизацией клеточных мембран, нарушением тока Na+, медленного входящего тока Са2+ и одностороннего тока K+.

2 (Диметиламино)этанол и натрия бикарбонат обладают основными свойствами и используются для доведения рН до необходимого значения.

Пример 1

1. Очистка 2-диэтиламино-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида (ФАД)

В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником загружают 33,5 мл воды очищенной, добавляют 10% раствор гидроокиси натрия до рН 9. Массу перемешивают 3-5 минут и прибавляют постепенно при перемешивании 10,0 г ФАД, тщательно перемешивают при температуре 20-25°С в течение 1,5-2 часов, постоянно контролируя рН.

Осадок ФАД отфильтровывают и промывают на фильтре водой очищенной до рН промывных вод 5.0-6,0.

Осадок ФАД сушат в вакууме 30-40 мм рт.ст. при температуре 25-30°С до постоянного веса.

Очищенный ФАД анализируют на % содержание и содержание посторонних примесей, в том числе 2,6-диметиланилина.

Получают 9,46 г очищенного ФАД. Выход на стадии составляет 94,6%.

2. Синтез 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутамината (ФС)

В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником загружают 94,6 мл воды очищенной, 9,46 г (0,0404 м) 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил) ацетамида и 5,945 г (0,0404 м) L-глутаминовой кислоты. Массу нагревают на водяной бане до температуры 55-60°С и перемешивают при указанной температуре в течение 30-40 мин. Водный раствор субстанции ФС фильтруют, упаривают в вакууме (30-40 мм рт.ст.) при температуре 30-35°С.

Осадок ФС сушат в вакууме 30-40 мм рт.ст. при температуре 30-35°С до постоянного веса.

Получают 13,852 г 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутамината (соединение 1). Белый или почти белый мелкокристаллический порошок без запаха. Гигроскопичен. Т_пл. 179-182°С (с разложением).

Найдено, %: С 59,68; Н 8,24; N 10,78 C₁₉H₃₁N₃O₅, м.м. 381,46

Ввчислено, %: С 59,82; Н 8,19; N 11,02

ИК-спектр, ∨см^-1 3260(NH), 2490(N⁺), 1675С=O), 1600(С=С)

ТСХ, примесь 2,6-диметиланилина отсутствует

Полученный продукт соответствует требованиям качества на фармакопейные субстанции

Пример 2

Получение фармацевтической композиции

В простерилизованный реактор вместимостью 1,0 л через микропористые мембраны подают воду для инъекций в количестве 800,0 мл. Затем последовательно при включенной мешалке и барботаже аргона загружают 5,0 г кислоты янтарной, 19,54 г магния сульфата гептагидрата (10,0 г безводного). Затем после полного растворения компонентов загружают 10,0 г соединения 1. Массу перемешивают в течение 10-15 мин до полного растворения субстанции. К полученному раствору при перемешивании приливают около 7,0 г 2-(диметиламино)этанола до рН 6,0.

Доводят объем полученного раствора до 1000,0 мл водой для инъекций. Раствор тщательно перемешивают в течение 5-10 минут. Отбирают пробу для определения рН и концентрации активной фармацевтической субстанции (соединения 1). Значение рН должно быть в пределах от 5,5 до 6,5, содержание соединения 1 должно быть в пределах от 9,5 мг до 10,5 мг в 1 мл раствора.

Раствор представляет собой прозрачную бесцветную жидкость, значение рН от 5,5 до 6,5, содержание соединения 1 в 1 мл препарата должно быть от 9,5 до 10,5 мг.

После стерилизующей фильтрации получают 930 мл готовой лекарственной формы.

Полученный раствор по всем показателя качества соответствует требованиям ОФС «Парентеральные лекарственные средства» и ОФС «Стерильность» Госфармакопеи XIII изд.

Пример 3

Аналогично примеру 2 из 5,0 г кислоты янтарной, 20,0 г безводного магния сульфата гептагидрата, 20,0 г соединения 1, 10,0 г 2-(диметиламино)этанола и воды для инъекций получают прозрачный бесцветный раствор, значение рН от 5,5 до 6,5.

Содержание соединения 1 в 1 мл препарата должно быть от 19,0 до 21,0 мг.

Полученный раствор по всем показателя качества соответствует требованиям ОФС «Парентеральные лекарственные средства» и ОФС «Стерильность» Госфармакопеи XIII изд.

Пример 4

Аналогично примеру 2 из 2,5 г кислоты янтарной, 4,0 г безводного магния сульфата гептагидрата, 4,0 г соединения 1, 6,0 г 2-(диметиламино)этанола и воды для инъекций получают прозрачный бесцветный раствор, значение рН от 5,5 до 6,5.

Содержание соединения 1 в 1 мл препарата должно быть от 3,8 до 4,2 мг.

Полученный раствор по всем показателя качества соответствует требованиям ОФС «Парентеральные лекарственные средства» и ОФС «Стерильность» Госфармакопеи XIII изд.

Пример 5

Аналогично примеру 2 из 5,0 г кислоты гидроксиянтарной, 10,0 г безводного магния сульфата гептагидрата, 10,0 г соединения 1, 4,0 г 2-(диметиламино)этанола и воды для инъекций получают прозрачный бесцветный раствор, значение рН от 5,5 до 6,5.

Содержание соединения 1 в 1 мл препарата должно быть от 9,5 до 10,5 мг.

Полученный раствор по всем показателя качества соответствует требованиям ОФС «Парентеральные лекарственные средства» и ОФС «Стерильность» Госфармакопеи XIII изд.

Исследования фармакологической активности фармацевтической композиции общей формулы (1) представлены в нижеследующих примерах.

Пример 6.

Антиаритмическая активность соединения 1 и прототипа на модели трепетания предсердий у собак

Антиаритмическая активность соединения 1 при трепетании предсердий изучена в опытах на беспородных собаках (10 особей обоего пола весом 10-15 кг, полученных из питомника филиала «Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России) при внутривенном капельном введении жидкой лекарственной формы соединения 1 в общем объеме 45-50 мл со скоростью 0,015 мг/кг в минуту. Общая продолжительность инфузии не превышала 100 мин.

Нарушение ритма сердца воспроизводили у собак электроимпульсной стимуляцией миокарда предсердий прямоугольными импульсами с частотой 15-20 Гц и длительностью 5-6 мс, вызывающей формирование устойчивой фибрилляции или трепетания предсердий, по методу (Rosenblueth, A. Studies of flutter and of fibrillation. The influence of artificial obstacles on experimental auricular flutter / A. Rosenblueth, G. Ramos // A.M. Heart. J. - 1947. - Vol. 33, No 5. - P. 677-682).

Результаты исследования фармацевтических композиций на основе соединения 1, а также прототипа лидокаина гидрохлорида, представлены в табл. 3.

Из предлагаемых в таблице данных хорошо видно, что в среднем через 69 мин после начала введения фармацевтических композиций на основе соединения 1 происходило подавление частоты эктопических сокращений более, чем на 50%. Накопленная доза фармацевтических композиций на основе соединения 1 таким образом составила в среднем 1,3 мг/кг или 69,3% от высшей терапевтической дозы для собак. Средняя продолжительность действия фармацевтических композиций на основе соединения 1 составила не менее 57 мин.

Таким образом, на модели трепетания предсердий у собак фармацевтические композиции на основе соединения 1 превосходили как по силе, так и по продолжительности действия лидокаина гидрохлорид.

Пример 7

Антиаритмическая активность фармацевтических композиций на основе соединения 1 на модели желудочковой аритмии, возникающей в позднюю стадию инфаркта миокарда у собак

Антиаритмическая активность фармацевтических композиций на основе соединения 1 на модели желудочковой аритмии изучена в опытах на беспородных бодрствующих собаках (10 особей обоего пола весом 10-15 кг, полученных из питомника филиала «Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России) на вторые сутки после проведения операции по воспроизведению аритмии при внутривенном капельном введении жидкой лекарственной формы фармацевтических композиций на основе соединения 1 в общем объеме 45-50 мл со скоростью 0,015 мг/кг в минуту. Общая продолжительность инфузии не превышала 100 мин.

Нарушение ритма сердца воспроизводили у наркотизированных тиопентал-натрием внутриплеврально (40-45 мг/кг) собак одномоментной перевязкой нисходящей ветви левой коронарной артерии, по методу (Harris A.S. Delayed development of ventricular ectopic rhythms following experimental coronary occlusion / A.S. Harris // Circulation. - 1950. - Vol. 1, No 6. - P. 1318).

Результаты исследования фармацевтических композиций на основе соединения 1, а также прототипа лидокаина гидрохлорида, представлены в табл. 4.

Из предлагаемых в таблице данных хорошо видно, что полное прекращение аритмии и восстановление синусового ритма наблюдалось у всех животных в группе через 64 мин после начала инфузионного капельного введения фармацевтических композиций 5 собакам со скоростью введения 0,015 мг/кг в мин. Накопленная доза фармацевтических композиций на основе соединения 1 составила в среднем 1,0 мг/кг или не менее 65,3% от высшей терапевтической дозы. Длительность полного антиаритмического эффекта равнялась в среднем 124 мин.

Таким образом, накопленная эффективная доза фармацевтических композиций на основе соединения 1 была большей, чем у прототипа. В отличие от прототипа лидокаина гидрохлорида введение фармацевтических композиций на основе соединения 1 вызывало формирование более длительного эффекта.

Пример 8.

Антифибрилляторная активность фармацевтических композиций на основе соединения 1 на модели реперфузионной фибрилляции предсердий у крыс

Антифибрилляторную активность фармацевтических композиций на основе соединения 1 изучена в опытах на 30 белых нелинейных лабораторных крысах-самцах исходным весом 180-220 г, полученных из питомника лабораторных животных «Андреевка» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России при внутривенном струйном введении жидкой лекарственной формы соединения 1 в дозах 0,9 и 4,2 мг/кг, общим объемом 0,8-1,0 мл.

Антифибрилляторную активность изучали у наркотизированных (тиопентал-натрия 45-50 мг/кг внутривенно) и переведенных на искусственную легочную вентиляцию крыс путем регистрации ЭКГ во втором стандартном отведении. Фибрилляцию желудочков вызывали ослаблением лигатуры, наложенной на левую коронарную артерию по методу, описанному в (Методические рекомендации по доклиническому изучению антиаритмических лекарственных средств П.А. Галенко-Ярошевский, Н.В. Каверина, А.Г. Камкин, А.И. Турилова, С.К. Богус, Ю.Р. Шейх-заде. - Руководство по доклиническому изучению лекарственных средств. Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - С. 385-417).

Результаты исследования представлены в таблице 5.

Введение фармацевтических композиций на основе соединения 1 в дозе 0,9 мг/кг сопровождалось возникновением эктопической активности у 3 животных из 6, составлявших опытную группу. Ни у одного животного не развилась фибрилляция желудочков. Во второй серии опытов доза фармацевтических композиций на основе соединения 1 составила 4,2 мг/кг (высшая терапевтическая доза для крыс). Ни у одной из 6 подопытных крыс не развилась желудочковая экстрасистолия, ни в одном случае фибрилляцию желудочков не регистрировалась.

Таким образом, оптимальной вводимой дозой фармацевтических композиций на основе соединения 1 можно считать 4,2 мг/кг, в которой лекарственное средство показало полный антиаритмический и антифибрилляторный эффект. В указанной дозе фармацевтические композиции на основе соединение 1 превосходят по силе эффекта прототип лидокаина гидрохлорид.

Исследования проведены в соответствии с этическими требованиями к работе с экспериментальными животными («Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР №755 от 12.08.1987 г.), Федеральный закон «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г., Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 г. №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики», ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами» (введен в действие 01.07.2016 г.) и одобрены Биоэтической комиссией.

По сравнению с известным решением применение фармацевтических композиций на основе соединения 1 позволяет увеличить силу антиаритмического и антифибрилляторного эффекта при формировании ишемических, реперфузионных и электроимпульсных нарушений ритма у собак и крыс, а также повысить продолжительность фармакологического действия.

Примечание: * - различия при сравнении с группой «Лидокаина гидрохлорид» статистически значимы при р<0,05 (точный критерий Фишера); ^а - различия при сравнении с группой «Лидокаина гидрохлорид» статистически значимы при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерий Даннета); ПАЭ - полный антиаритмический эффект; ЧАЭ - частичный антиаритмический эффект; ВТД - высшая терапевтическая доза

Примечание: * - различия при сравнении с группой «Лидокаина гидрохлорид» статистически значимы при р<0,05 (точный критерий Фишера); ^а - различия при сравнении с группой «Лидокаина гидрохлорид» статистически значимы при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерий Даннета); ПАЭ - полный антиаритмический эффект; ЧАЭ - частичный антиаритмический эффект; ВТД - высшая терапевтическая доза

Примечание: * - различия при сравнении с контролем достоверны при р<0,05 (точный критерий Фишера)

Формула изобретения

Фармацевтическая композиция на основе 2-(диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутамината, обладающая пролонгированной противоаритмической активностью, содержащая в качестве вспомогательных веществ магния сульфат, кислоту янтарную или гидроксиянтарную, 2-(диметиламино)этанол и воду.

Изобретение "2-(Диэтиламино)-N-(2,6-диметилфенил)ацетамида L-глутаминат, обладающий пролонгированной противоаритмической активностью, фармацевтическая композиция" (Скачилова София Яковлевна, Коротоножкин Алексей Викторович, Алешина Валентина Алексеевна, Гирева Наталия Николаевна, Блинова Екатерина Валериевна, Семелева Елена Владимировна, Блинов Дмитрий Сергеевич, Желтухин Николай Константинович, Шилова Елена Владимировна) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога