Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста

Название	Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста
Разработчик (Авторы)	Сучкова Г.Д., Шиляев Р.Р., Чемоданов В.В., Баклушин А.Е., Фадеева О.Ю.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2140082
Дата регистрации	20.10.1999
Правообладатель	Ивановская государственная медицинская академия
Область применения (класс МПК)	G01N 33/49 (1995.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и дерматологии.

Без четкой дифференцировки отдельных форм аллергодерматозов невозможно назначить рациональное лечение, диетический режим и определить прогноз, так как каждая форма связана с определенными провоцирующими факторами и фоновой патологией. Так, для больных с экзематозными формами характерна пищевая и микробная сенсибилизация, а с лихеноидными - минимальная церебральная недостаточность, постнатальная гипоксия плода.

Прототипом явился существующий в настоящее время клинический способ диагностики формы аллергодерматоза (Торопова Н.П., Синявская О.А. Экзема и нейродермит у детей. - Екатеринбург. - 1993. - С.75-121), который субъективен и зависит от профессиональных навыков врача, а в период, когда у больного имеются признаки как экземы, так и нейродермита, часто приводит к ошибкам диагностики, так как не позволяет четко установить преобладание той или иной формы в короткий промежуток времени.

Мы поставили перед собой задачу разработать диагностические критерии для более точной и ранней диагностики превалирующей формы аллергодерматоза у детей до 3 лет, в период возрастной эволюции процесса.

В качестве критерия оценки клинической формы мы использовали информацию об изменении спонтанной адгезии нейтрофилов, т.е. способности их к прилипанию на различных субстратах, в том числе и к эндотелию сосудов. Теоретическим обоснованием данного способа является следующее. Нейтрофил - высокодифференцированная короткоживущая клеточная популяция, ответственная за индукцию и реализацию воспалительной реакции в условиях сенсибилизированного организма, находится под контролем нервной системы. Эти клетки - посредники между соединительной тканью и нервной системой. Нейтрофил получает сигнал от последней для реализации в тканях своего функционального потенциала и одновременно осуществляет механизм обратной связи, информируя клетки вегетативных ядер нервной системы о метаболическом состоянии и о клеточной композиции тканей организма (Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей //Лаб. Дело. -1988.- N 6. -С.3 -12). Большинство реакций, в которых участвует нейтрофил, совершается в тканях. Поэтому адгезивность, характеризующая способность клеток прикрепляться и задерживаться на определенных субстратах, имеет важное значение. Адгезивность принадлежит к энергетически зависимым реакциям клеток на адекватные раздражители. Нейтрофилы приобретают гиперадгезивность, отвечая на стимулирующие агенты, которые возникают внутри сосудистого русла и за его пределами. Нейтрофил из циркулирующего становится маргинальным, контактируя с эндотелиоцитами, часть нейтрофилов ингибирует стенку сосуда, переходя в ткани (Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Медицина. Новосибирск, 1983. -255с). Прилипание нейтрофилов к поверхности эндотелия непосредственно предшествует миграции полиморфноядерных лейкоцитов (Damerau B., Keller H.Comparison of adhesion to glass and aggregation of human leucocytes. // Agents Action. - 1983. -Vol. 13. -N 1. -P.53-58.; Patаrrogo M. Leukocyte-cell adhesion a molecular process fundomental in leucocyte physiology // Immunol. Rev. -1990. -Vol.114. -N 2. -P. 67-108.

Таким образом, изменение адгезивных свойств нейтрофилов является универсальным индикатором, отражающим характер воспаления в очагах у больных с аллергодерматозами.

Нами разработан способ диагностики клинической формы аллергодерматоза с помощью простой доступной методики определения спонтанной адгезии нейтрофилов, выполняемой в короткий промежуток времени.

Диагностика осуществляется следующим образом. Из 0,8-1 мл венозной крови пациента, после внесения ее в раствор, состоящий из 2,7% раствора трилона Б и 6% Декарта (раствор полиглюкина) в соотношении 1:2 (0,5 мл раствора трилона Б и 1 мл полиглюкина), выделялись лейкоцитарные клетки. Полученная смесь после перемешивания отстаивалась при комнатной температуре в течение 30 минут. Плазма, обогащенная лейкоцитами, собиралась пастеровской пипеткой и наслаивалась на двухступенчатый градиент плотности фиколл-верографина. Центрифугированием при 1000 об/мин в течение 30 минут получали две субпопуляции лейкоцитов (нейтрофилы и мононуклеары), которые дважды отмывали в среде Хенкса (pH 7,2-7,4).

Определение жизнеспособности ядросодержащих клеток и их подсчет проводили с помощью витальной окраски 0,1% раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере (pH 7,2-7,4). Подсчет жизнеспособных клеток проводили в камере Горяева. Число жизнеспособных клеток в суспензиях составляло 90-95%.

По 0,1 мл взвеси нейтрофилов и 0,1 мл раствора Хенкса (pH 7,4) смешивали, после чего 0,1 мл взвеси помещали в камеру Горяева и подсчитывали количество клеток в 5 больших квадратах, а другую часть смеси, состоящую из 0,05 мл клеток и 0,05 мл раствора Хенкса (pH 7,4) раскапывали в планшеты для иммунологических исследований с v-образным дном и помещали в термостат на 2 часа при температуре 37^oC. После инкубации планшет тщательно встряхивали, перемешивали и переносили содержимое в счетную камеру Горяева, где в 5 больших квадратах подсчитывалось число клеток, неадгезировавшихся при инкубировании.

Показатель спонтанной адгезии (САД) (%) рассчитывали по формуле
САД=К_к-К_неадг / К_к • 100%,
где К_к - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
К_неадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Нами обследовано 54 ребенка раннего возраста с различными проявлениями аллергодерматозов. При этом у 20 детей имелись проявления на коже в виде истиной экземы, у 20 - лихенизация и локализация поражения свидетельствовали о сформированном диффузном нейродермите, а у 4 больных процесс носил признаки той и другой формы, 10 детей того же возраста составили контрольную группу.

Диагноз клинической формы кожных проявлений у детей ставился на основании морфологических признаков, локализации, характеристики дермографизма по классификации О.А. Синявской с соавт., (1979). В ходе исследований нами были установлены следующие показатели спонтанной адгезии нейтрофилов (табл. 1).

Для доказательства адекватности оценки формы аллергодерматоза по показателю спонтанной адгезии нейрофилов и клиническому способу диагностики мы провели сопоставление данных клинического осмотра с данными предложенного способа, а также наблюдение за изменением клинических проявлений в динамике, в случаях сочетания признаков экзематозной и лихеноидной форм у одного и того же ребенка. Клиническая картина оценивалась по универсальному статусу формализированной истории болезни 53 Ленинградского ОТКЗ МЗ РСФСР (1982), где высоко информативными оказались прежде всего локализация и характер первичных и вторичных морфологических элементов, наличие зуда, характер дермографизма.

В результате наших исследований, в первой группе детей показатели спонтанной адгезии нейтрофилов были равны 29,18% ± 1,83, что соответствовало экзематозной форме аллергодерматоза. Во второй группе детей показатели спонтанной адгезии были равны 53,75% ± 3,48 (P < 0,001), что соответствовало лихеноидной форме (нейродермит) и были выше аналогичных показателей контрольной группы (что не противоречило гистопатологическим исследованиям, свидетельствующим о большом количестве нейтрофилов в очагах с лихенизацией (Цветкова Г. М., Мордовцев В.Н. Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи. - М.: Медицина, 1986, -299 с.).

У детей в период трансформации дерматоза из экзематозной формы в лихеноидную (4 группа) показатели спонтанной адгезии были ближе к показателям 2 группы (лихеноидной), а наблюдение за ними в динамике через 4-6 месяцев позволило поставить лихеноидную форму (нейродермит) дерматоза и по клинической картине.

Таким образом, показатели спонтанной адгезии нейтрофилов имеют достаточно отчетливую прогностическую значимость, обеспечивая верификацию патоморфологической формы аллергодерматоза за несколько месяцев до развития клинических манифестаций, что позволяет назначать патогенетическую терапию в более ранние сроки.

Пример 1. Больной С., 11 мес. Ребенок от 2-й беременности, протекавшей на фоне гестоза и анемии, а также осложненной кандидозным кольпитом, 2 родов.

При рождении крик сразу, масса 3,750 г, длина 53 см. На естественном вскармливании до 4 месяцев. Психомоторное развитие - по возрасту. Фоновая патология: энцефалопатия перинатальная. Из перенесенных заболеваний - бронхит в 4,5 месяца. Первые высыпания на коже в виде эритемы, шелушения в области щек, теменной области с 1,5 месяцев. С 5,5 месяцев процесс стал распространенным. В области щек и разгибательной поверхности конечностей на фоне эритемы и отека появились папуло-везикулезные элементы, мокнутие. Наблюдался и получал лечение с диагнозом истинная экзема.

Госпитализирован в 11 месяцев. Беспокоит зуд, усиливающийся при снятии одежды и беспокойстве ребенка. На коже кроме описанных выше проявлений экземы в области локтевых и подколенных сгибов, лучезапястных суставов появились эритема и папулезные элементы, дермографизм носит смешанный характер. Проведено исследование спонтанной адгезии нейтрофилов, выделенных из 0,8-1 мл венозной крови пациента на двухступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина. При этом оценивалась способность нейтрофилов к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов с v-образным дном при двухчасовой инкубации при температуре 37^oC.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле
САД = К_к - К _неадг/ К_к • 100%,
где К_к - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
К_неадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Показатель спонтанной адгезии нейтрофилов, полученный у обследуемого ребенка, составил 62,79%, что позволило предположить преобладание у него лихеноидной формы дерматоза. Осмотр ребенка через 4 месяца показал наличие у него клиники сформированного диффузного нейродермита.

Итак, заявленный способ оказался более информативным и прогностически точным в сравнении с традиционным клиническим. Полученная информация объективна, получена за короткий срок, а следовательно, позволяет ставить диагноз в ранние сроки и проводить своевременно соответствующую патогенетическую терапию, что позволяет предупредить развитие инвалидизирующих форм дерматоза.

Пример 2. Больной Г., 1 год 4 мес. Ребенок от 1-й беременности, роды путем кесарева сечения, масса при рождении 3200 г, длина 51 см. Крик при рождении сразу. В период новорождености страдал молочницей слизистой рта. Психомоторное развитие - по возрасту. У отца ребенка - экзема кистей.

Первые манифестации на коже щек, конечностей, туловища по типу эритематосквамозных очагов с папулезными и везикулезными элементами, очагами мокнутия с 4-месячного возраста. Наблюдался с диагнозом экзема. Госпитализирован в возрасте 1 года 4 месяцев.

Процесс в области щек носил признаки экземы в виде инфильтрации, отека, эритемы, микровезикуляции и мокнутия, тогда как на участках кожи в области шеи, локтевых и коленных сгибов появились лихеноидные папулы на фоне эритемы, усилился зуд. Постановка диагноза по клинической картине вызывала определенные трудности. Проведено исследование спонтанной адгезии нейтрофилов, выделенных из 0,8-1 мл венозной крови пациента на двухступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина. При этом оценивалась способность нейтрофилов к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов с v-образным дном при двухчасовой инкубации при температуре 37^oC.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле
САД = К_к - К_неадг/К_к • 100%,
где К_к - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;
К_неадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Полученный показатель 58,88% позволил поставить диагноз диффузного нейродермита.

Осмотр ребенка через 6 месяцев показал отсутствие акзематозных проявлений, но сохранение высыпаний в виде лихеноидных папул на эритематозном фоне в области лучезапястных и коленных сгибов, наличие лихенизации (клинические признаки диффузного нейродермита).

Таким образом, заявленный способ является объективным и информативным, отражает изменения в организме, развившиеся еще до клинической манифестации, лихеноидной формы, что делает возможным до четких клинических проявлений нейродермита прогнозировать у ребенка ее развитие и провести патогенетическое лечение в более ранние сроки. Кроме того, заявленный способ информативен, объективен по сравнению с клиническим методом, нетрудоемок, прост и общедоступен в техническом исполнении.

Формула изобретения

Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста, включающий определение формы аллергодерматоза по клиническим признакам, отличающийся тем, что становится возможным в короткий промежуток времени устанавливать преобладающую форму аллергодерматоза в период трансформации экземы в нейродермит, по показателю спонтанной адгезии нейтрофилов, находящемуся в случаях преобладания нейродермита в пределах 53,75 ± 3,48 и снижающемуся до уровня 29,18% ± 1,83 при преобладании у них признаков экземы.

Изобретение "Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста" (Сучкова Г.Д., Шиляев Р.Р., Чемоданов В.В., Баклушин А.Е., Фадеева О.Ю.) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога