L международная выставка-презентация
научных, технических, учебно-методических и литературно-художественных изданий
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ПАЦИЕНТОВ С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ
| Название | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ПАЦИЕНТОВ С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ |
|---|---|
| Разработчик (Авторы) | Лебедев М.Ю., Новиков В.В., Мартынова Т.Г., Птицына Ю.С., Кораблев С.Б., Вилков С.А. |
| Вид объекта патентного права | Изобретение |
| Регистрационный номер | 2176795 |
| Дата регистрации | 10.12.2001 |
| Правообладатель | Нижегородский государственный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии |
| Область применения (класс МПК) | G01N 33/53 (2000.01) |
Описание изобретения
Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии, и может применяться для исследования иммунной системы. Способ позволяет повысить достоверность определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток как в периферической крови, так и в организме в целом. У пациентов с термической травмой осуществляют забор крови из периферической вены. Из крови получают сыворотку, определяют в ней содержание растворимой формы Fas-рецептора и при повышении уровня Fas-рецептора в 1,5 раза и более по сравнению с нормой судят об активации клеточного звена иммунной системы.
Изобретение относится к медицине, в частности к способам исследования иммунной системы, и может быть использовано для определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой.
Известен способ определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой, заключающийся в исследовании периферической крови и определении низкомолекулярной фрагментации ДНК иммунокомпетентных клеток (см. Teodorczyk-Injeyan JA, Cembrzynska-Nowak М, Lalani S at al. Immune deficiency following thermal trauma is associated with apoptotic cell death. - J Clin Immunol 1995. - 15.- 6.- P. 318-28).
Однако при этом способе в процессе выделения ДНК требуются дорогие реактивы, обладающие токсическими свойствами. Кроме того, требуется персонал, обладающий навыками проведения иммунологических и иммунохимических анализов.
В качестве прототипа нами выбран способ определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы, заключающийся в заборе крови из периферической вены, выделении иммунокомпетентных клеток и определении на их поверхности Fas-рецептора, опосредующего апоптоз (см. Барышников А.Ю., Тоневицкин А. Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике - М., 1997, стр. 158-160).
Однако при этом способе в процессе выделения клеток теряется часть Fas-рецепторов с поверхности клеток, что приводит к снижению достоверности результатов. Кроме того, функциональное состояние клеток периферической крови не всегда сопоставимо с функциональным состоянием иммунной системы в целом.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение достоверности определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток как в периферической крови, так и в организме в целом.
Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови из периферической вены, из крови получают сыворотку, определяют в ней содержание растворимой формы Fas-рецептора и при повышении его уровня в 1,5 раза и более в сравнении с нормой судят об активации клеточного звена иммунной системы.
Способ определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой осуществляют следующим образом: забирают кровь из периферической вены (5-6 мл) в сухие пробирки. Для образования сгустка образцы крови последовательно выдерживают по 30oС в термостате при температуре +37oC и в холодильнике при температуре +4oC. После этого свернувшуюся кровь центрифугируют при 200 g 15 мин. Сыворотку отбирают в сухие, чистые пробирки. Полученную сыворотку хранят в холодильнике при температуре -60oС до 5 месяцев. Очищенные с помощью сульфата аммония и ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе козьи поликлональные антитела против поверхностных антигенов мононуклеарных клеток сорбируют в лунки планшетов для иммуноферментного анализа в течение 16-18 ч при 4 - 8oC. После отмывания не связавшихся антител в лунки наносят образцы исследуемых сывороток с последующей инкубацией планшетов в течение 1 ч при комнатной температуре и отмывкой не связавшихся белков. Затем лунки планшетов в тех же условиях последовательно обрабатывают рабочим раствором очищенных моноклональных антител ИКО-160 (против Fas-рецептора) и козьими антителами против иммуноглобулинов мыши, конъюгированными с пероксидазой хрена. Для каждой тестируемой сыворотки ставят отрицательный контроль, где вместо моноклональных антител лунки планшетов обрабатывают раствором поликлональных мышиных иммуноглобулинов в той же концентрации, что и моноклональные антитела. В качестве положительного контроля используют сыворотку крови больных системной красной волчанкой. Для определения нормального уровня содержания растворимой формы Fas-рецептора в сыворотке крови исследуют образцы сывороток здоровых доноров. При повышении уровня растворимой формы Fas-рецептора по сравнению с нормой в 1,5 раза и более судят об активации клеточного звена иммунной системы.
Примеры применения:
При исследовании уровня растворимой формы Fas-рецептора в сыворотке крови 25 здоровых доноров показано, что ее содержание в норме было 534±31,8 условных единиц (у. е. ). При обследовании пациента Б. с диагнозом: ожог пламенем 30% п.т., ожог верхних дыхательных путей, крайне тяжелый ожоговый шок (возраст 33 года, N ист. болезни 185720, травма от 14.03.99 года), уровень растворимой формы Fas-рецептора в сыворотке крови составил:
18.03.99 - 243 у.е. При одновременном исследовании содержание клеток с активационным фенотипом - CD25+клетки - 6% (N - 16%), CD71+клетки - 6% (N - 11%), CD26+клетки-12% (N - 15%). Число CD95+клеток - 2% (N - 15%).
6.04.99 - 750 у.е. При одновременном исследовании содержание клеток с активационным фенотипом CD25+клетки - 24%, CD71+клетки - 25%, CD26+клетки - 12%. Число CD95+клеток - 2%.
Из приведенного примера видно, что при первом исследовании состояния клеточного звена иммунной системы выявлено состояние иммуносупрессии, которое сопровождается низким содержанием растворимой формы Fas-рецептора в сыворотке крови. Повышение уровня растворимой формы Fas-рецептора в сыворотке крови, которое обнаружено при повторном исследовании, идет вместе с признаками активации клеточного иммунитета. Количество клеток, которые несут на своей поверхности Fas-рецептор, и в том и в другом случае остается неизменным.
Способ изучения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой позволяет с высокой достоверностью судить о процессе активации иммунокомпетентных клеток. Растворимая форма Fas-рецептора попадает в сыворотку крови вне зависимости от места ее образования, поэтому можно судить об этом как на уровне периферической крови, так и на уровне организма в целом. Способ информативен и выполним в условиях научного медицинского учреждения и может использоваться в исследовательской и лечебной практике.
Формула изобретения
Способ определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой путем забора крови из периферической вены, отличающийся тем, что из крови получают сыворотку, определяют в ней содержание растворимой формы Fas-рецептора и при повышении уровня Fas-рецептора в 1,5 раза и более по сравнению с нормой судят об активации клеточного звена иммунной системы.
Медаль Альфреда Нобеля