ИММУНОЦИТОКИН, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛКОВЫЙ КОМПЛЕКС НА ОСНОВЕ IL-15/IL-15Rα, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ

Название	ИММУНОЦИТОКИН, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛКОВЫЙ КОМПЛЕКС НА ОСНОВЕ IL-15/IL-15Rα, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
Разработчик (Авторы)	Улитин Андрей Борисович, Кононов Алексей Владимирович, Агеев Сергей Андреевич, Гордеев Александр Андреевич, Виноградова Елена Владимировна, Евдокимов Станислав Рудольфович, Шмакова Александра Павловна, Митрошин Иван Владимирович, Морозов Дмитрий Валентинович
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2753282
Дата регистрации	12.08.2021
Правообладатель	ЗАКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "БИОКАД"
Область применения (класс МПК)	A61K 38/19 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)

Описание изобретения

Группа изобретений относится к терапии рака и аутоиммунного заболевания. Иммуноцитокин для стимулирования активации и/или пролиферации IL-15Rбета/гамма-положительных клеток включает гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα, содержащий IL-15Rα и IL-15, которые связаны с константным доменом легкой цепи антитела или константными доменами тяжелой цепи антитела, включающими первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи, где, если IL-15 или IL-15Rα связан с константным доменом легкой цепи антитела, другая часть гетеродимерного белкового комплекса, выбранная из IL-15Rα или IL-15, связана с константными доменами тяжелой цепи антитела. Также раскрыты выделенная нуклеиновая кислота, экспрессионный вектор, клетка-хозяин для получения иммуноцитокина, фармацевтическая композиция, способ лечения онкологического заболевания и способ активации биологической активности T-клеточной популяции или NK-клеточной популяции у субъекта. Группа изобретений обеспечивает повышенную активность при лечении онкологического заболевания. 11 н. и 67 з.п. ф-лы, 25 ил., 4 табл., 12 пр.....

Краткое описание изобретения

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к иммуноцитокину для стимулирования активации и/или пролиферации IL-15Rбета/гамма-положительных клеток, который включает гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα, содержащий:

1) IL-15Rα, который связан с

а) константным доменом легкой цепи антитела или

б) константными доменами тяжелой цепи антитела, включающими первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи;

2) IL-15, который связан с

а) константными доменами тяжелой цепи антитела, включающими первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи, или

б) константным доменом легкой цепи антитела;

при этом первый константный домен тяжелой цепи антитела и константный домен легкой цепи антитела в составе гетеродимерного комплекса имеют или не имеют ковалентную ассоциацию через природный S-S мостик и,

где, если IL-15 или IL-15Rα связан с константным доменом легкой цепи антитела, то другая часть гетеродимерного белкового комплекса, выбранная из IL-15Rα или IL-15, связана с константными доменами тяжелой цепи антитела......

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Формат иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA).

Фиг. 2. Формат иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA).

Фиг. 3. Формат иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα и иммуномодулирующее антитело, которое специфически ингибирует PD-1 путь (Fab- CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcknobLALA).

Под knob подразумеваются мутации с образованием структуры «выступ (Knob) во впадину (Hole)» между первым вариантом Fc и вторым вариантом Fc в CH3 домене.

Фиг. 4. Формат иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα и иммуномодулирующее антитело, которое специфически ингибирует PD-1 путь (Fab-CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcknobLALA).

Фиг. 5. Вектор pEE-IL15Ra-CK.

AmpR - ген бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину,

pUC origin - pUC ориджин репликации в бактериях,

CMV-Promoter - промотор ранних генов цитомегаловируса,

leader - лидерная последовательность,

IL15Ra - ген, кодирующий субъединицу α рецептора интерлейкина 15,

CK - ген, кодирующий константный домен легкой цепи,

Poly A - последовательность сигнала полиаденилирования, для повышения стабильности мРНК,

OriP - ориджин репликации в бактериях или

Высококопийный ColE1/pMB1/pBR322/pUC ориджин репликации в бактериальных клетках.

Фиг. 6. Вектор pEE-IL15-CH1-Fc-LALA.

AmpR - ген бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину,

pUC origin - pUC ориджин репликации в бактериях,

CMV-Promoter - промотор ранних генов цитомегаловируса,

leader - лидерная последовательность,

IL15 - ген, кодирующий интерлейкин 15,

CH1 - ген, кодирующий первый константный домен тяжелой цепи,

Fc-LALA - ген, кодирующий Fc-фрагмент с мутациями LALA (мутации L234A и L235A в константном домене CH2 Fс-фрагмента),

Poly A - последовательность сигнала полиаденилирования, для повышения стабильности мРНК,

OriP - ориджин репликации в бактериях или

высококопийный ColE1/pMB1/pBR322/pUC ориджин репликации в бактериальных клетках.

Фиг. 7. Вектор pEE-BCD100-02-VL-CK.

AmpR - ген бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину,

pUC origin - pUC ориджин репликации в бактериях,

CMV-Promoter - промотор ранних генов цитомегаловируса,

leader - лидерная последовательность,

aPD1-VL - ген, кодирующий легкую цепь антитела, которое специфически связывается с PD1,

CK - ген, кодирующий константный домен легкой цепи,

Poly A - последовательность сигнала полиаденилирования, для повышения стабильности мРНК,

OriP - ориджин репликации в бактериях или

высококопийный ColE1/pMB1/pBR322/pUC ориджин репликации в бактериальных клетках.

Фиг. 8. Вектор pEE-BCD100-02-VH-CH1-Fc-hole-LALA.

AmpR - ген бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину,

pUC origin - pUC ориджин репликации в бактериях,

promoter - промотор ранних генов цитомегаловируса,

leader - лидерная последовательность,

aPD1-VH - ген, кодирующий вариабельный домен тяжелой цепи антитела, которое специфически связывается с PD1,

CH1 - ген, кодирующий первый константный домен тяжелой цепи,

Fc-hole-LALA - ген, кодирующий Fc-фрагмент с мутациями для образования hole и LALA (мутации L234A и L235A в константном домене CH2 Fс-фрагмента),

STOP - стоп-кодон,

OriP - ориджин репликации в бактериях или

высококопийный ColE1/pMB1/pBR322/pUC ориджин репликации в бактериальных клетках.

Фиг. 9. Вектор pEE-IL15-CH1-Fc-knob-LALA.

AmpR - ген бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину,

pUC origin - pUC ориджин репликации в бактериях,

CMV-Promoter - промотор ранних генов цитомегаловируса,

leader - лидерная последовательность,

IL15 - ген, кодирующий интерлейкин 15,

CH1 - ген, кодирующий первый константный домен тяжелой цепи,

Fc-knob-LALA - ген, кодирующий Fc-фрагмент с мутациями для образования knob и LALA (мутации L234A и L235A в константном домене CH2 Fс-фрагмента),

STOP - стоп-кодон,

OriP - ориджин репликации в бактериях или

высококопийный ColE1/pMB1/pBR322/pUC ориджин репликации в бактериальных клетках.

Фиг. 10 А. SDS-гель-электрофорез с бета-меркаптоэтанолом

1. Контрольное антитело 5 мкл

2. Fermentas unstained marker

3. -

4. Среда роста с CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA до очистки 10 мкл

5. Среда роста с CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA после очистки 10 мкл

6. Очищенный CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA 10 мкл

7. -

8. Среда роста с CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA до очистки 10 мкл

9. Среда роста с CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA после очистки 10 мкл

10. Очищенный CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA 10 мкл

Фиг. 10 Б. SDS-гель-электрофорез без бета-меркаптоэтанола

1. Очищенный CK_IL15Ra_Hc_IL15CH1FcLALA 10 мкл

2. Очищенный CK_IL15_Hc_IL15RaCH1FcLALA 10 мкл

3. Fermentas unstained marker

4. Контрольное антитело 5 мкл

Фиг. 11. Тест на определение пролиферационной активности. Для теста использовали клеточную линию NK-92. Тест проводили в культуральном 96-луночном планшете. Суспензия содержала клетки NK-92, исследуемое антитело в указанной на графике концентрации. Все компоненты суспензии готовили в среде RPMI-1640, содержащей эмбриональную бычью сыворотку и глутамин. После добавления всех компонентов планшеты инкубировали при 37°С, 5% CO2. Далее в лунки вносили краситель Alamar Blue. После инкубации измеряли интенсивность флуоресценции в лунках.

Фиг. 12. Тест на определение пролиферационной активности. Для теста использовали выделенные натуральные киллеры, выделенные из PBMC здоровых доноров, методом негативной селекции. Тест проводили в культуральном 96-луночном планшете. Суспензия содержала клетки натуральных киллеров, исследуемое антитело в указанной на графике концентрации. Все компоненты суспензии готовили в среде культивирования, содержащей аутологичную плазму человека. После добавления всех компонентов планшеты инкубировали при 37°С, 5% CO2. Далее в лунки вносили краситель Alamar Blue. После инкубации измеряли интенсивность флуоресценции в лунках.

Фиг. 13. Тест на определение аPD1 спец. активности. Для теста использовали клеточную линию Jurkat NFAT-FLuc PD-1, созданную на основе клеточной линии Jurkat, стабильно экспрессирующую на поверхности PD-1 и содержащую ген, кодирующий люциферазу светляка, под контролем NFAT-промотора; а также клеточную линию Raji PDL1, созданную на основе клеточной линии Raji, стабильно экспрессирующую на поверхности PDL1. Тест проводили в культуральном 96-луночном планшете. Суспензия в каждой лунке содержала клетки Jurkat NFAT-FLuc PD-1, клетки Raji PDL1, aCD3/aTAA1 в концентрации 1 нг/мл, исследуемое антитело в указанной на графике концентрации. После добавления всех компонентов планшеты инкубировали при 37°С, 5% CO2 и далее, с помощью набора для оценки люминесценции, измеряли интенсивность люциферы в лунках.

Фиг. 14. Анализ специфической активности анти-PDL1/IL15SA антител на репортерной клеточной линии.

Фиг. 15. Тест на определение влияния на ADCC натуральных киллеров. Для теста использовали натуральные киллеры, выделенные из PBMC здоровых доноров, методом негативной селекции. Тест проводили в культуральном 96-луночном планшете. Суспензия содержала клетки натуральных киллеров и клетки Raji, эффекторное антитело Ритуксимаб и исследуемое антитело в указанной на графике концентрации. Все компоненты суспензии готовили в среде культивирования, содержащей эмбриональную бычью сыворотку и глутамин. После добавления всех компонентов планшеты инкубировали при 37°С, 5% CO2. Далее собирали культуральную жидкость и исследовали содержание лактатдегидрогеназы с использованием набора для определения ЛДГ.

Фиг. 16. Результаты проверки специфической активности иммуноцитокинов в отношении усиления ADCC способности rituximab против TAA-репортерной линии.

Фиг. 17. Исследование цитотоксичности для вариантов иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (IL15SA), на NK-клетках.

Результаты свидетельствуют об отсутствии значимого цитотоксического эффекта кандидатов, то есть не более 10% уменьшения количества иммунореактивных клеток в сравнении с негативным контролем AB (отсутствие каких-либо экзогенных антител).

Фиг. 18. Исследование цитотоксичности для IL15SA вариантов на В-клетках.

Результаты свидетельствуют об отсутствии значимого цитотоксического эффекта кандидатов, те не более 10% уменьшения количества иммунореактивных клеток в сравнении с негативным контролем AB (отсутствие каких-либо экзогенных антител).

Фиг. 19. Исследование цитотоксичности для IL15SA вариантов на CD3+ -клетках.

Фиг. 20. Исследование цитотоксичности для IL15SA вариантов на CD4+ -клетках.

Фиг. 21. Исследование цитотоксичности для IL15SA вариантов на CD8+ -клетках.

Фиг. 22. Хроматограмма. Данная хроматограмма демонстрирует высокую гомогенность (содержание агрегатов в растворе составила не более 5%) иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (IL15 суперагониста).

Фиг. 23. Схема эксперимента по определению противоопухолевой активности препаратов иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (BCD-225) в in vivo мышиной модели опухоли.

Фиг. 24. Результаты эксперимента по определению противоопухолевой активности вариантов препарата иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (BCD-225) (график) в in vivo мышиной модели опухоли.

Фиг. 25. Результаты эксперимента по определению противоопухолевой активности вариантов препарата иммуноцитокина, включающего гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα (BCD-225) (диаграмма) в in vivo мышиной модели опухоли.

Формула изобретения

1. Иммуноцитокин для стимулирования активации и/или пролиферации IL-15Rбета/гамма-положительных клеток, включающий гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα, содержащий:

1) IL-15Rα, который связан с

а) константным доменом легкой цепи антитела или

2) IL-15, который связан с

б) константным доменом легкой цепи антитела;

где, если IL-15 или IL-15Rα связан с константным доменом легкой цепи антитела, другая часть гетеродимерного белкового комплекса, выбранная из IL-15Rα или IL-15, связана с константными доменами тяжелой цепи антитела.

2. Иммуноцитокин по п.1, где первый константный домен тяжелой цепи антитела и константный домен легкой цепи антитела в составе гетеродимерного комплекса имеют ковалентную ассоциацию через природный S-S мостик.

3. Иммуноцитокин по п.1, где первый константный домен тяжелой цепи антитела и константный домен легкой цепи антитела в составе гетеродимерного комплекса не имеют ковалентную ассоциацию через природный S-S мостик.

4. Иммуноцитокин по п.1, где константный домен легкой цепи антитела выбирают из CK или CL.

5. Иммуноцитокин по п.1, где IL-15Rα имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 9 или любой известный вариант IL-15Rα, содержащий мутации, с аналогичной биологической активностью.

6. Иммуноцитокин по п.1, где IL-15 имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 10 или любой известный вариант IL-15, содержащий мутации, с аналогичной биологической активностью.

7. Иммуноцитокин по п.1, где IL-15Rα связан с константным доменом легкой цепи антитела.

8. Иммуноцитокин по п.7, где IL-15Rα, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 19.

9. Иммуноцитокин по п.1, где IL-15 связан с константным доменом легкой цепи антитела.

10. Иммуноцитокин по п.9, где IL-15, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 21.

11. Иммуноцитокин по п.1, где первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи, соединены через шарнир.

12. Иммуноцитокин по п.1, где IL-15 или IL-15Rα связан с константными доменами тяжелой цепи антитела, идущими в следующем порядке CH1-шарнир-CH2-CH3.

13. Иммуноцитокин по п.12, где IL-15Rα связан с константными доменами тяжелой цепи антитела.

14. Иммуноцитокин по п.13, где IL-15Rα, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 22.

15. Иммуноцитокин по п.12, где IL-15 связан с константными доменами тяжелой цепи антитела.

16. Иммуноцитокин по п.15, где IL-15, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 20.

17. Иммуноцитокин по п.1, где

IL-15Rα, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 19, а

IL-15, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 20.

18. Иммуноцитокин по п.1, где

IL-15Rα, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 22, а

IL-15, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 21.

19. Иммуноцитокин по п.1, имеющий мутации в мономере Fc-фрагмента, приводящие к отсутствию ADCC, CDC и/или ADCP свойств у указанного иммуноцитокина.

20. Иммуноцитокин по п.1, где Fc-фрагмент относится к IgG.

21. Иммуноцитокин по п.20, где изотип Fc-фрагмента выбирают из группы: IgG1, IgG2 или IgG4 человека.

22. Иммуноцитокин по любому из вышеуказанных пп.1-21, включающий два вышеуказанных гетеродимерных белковых комплекса на основе IL-15 и IL-15Rα.

23. Иммуноцитокин по п.22 для применения в качестве терапевтического средства для терапии рака или аутоиммунного заболевания.

24. Иммуноцитокин по п.23 для применения в качестве терапевтического средства для терапии рака.

25. Иммуноцитокин для стимулирования активации и/или пролиферации IL-15Rбета/гамма-положительных клеток, включающий гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα и иммуномодулирующее антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически ингибируют PD-1 путь,

где гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα содержит:

1) IL-15Rα, который связан с

а) константным доменом легкой цепи антитела или

2) IL-15, который связан с

б) константным доменом легкой цепи антитела;

26. Иммуноцитокин по п.25, где первый константный домен тяжелой цепи антитела и константный домен легкой цепи антитела в составе гетеродимерного комплекса имеют ковалентную ассоциацию через природный S-S мостик.

27. Иммуноцитокин по п.25, где первый константный домен тяжелой цепи антитела и константный домен легкой цепи антитела в составе гетеродимерного комплекса не имеют ковалентную ассоциацию через природный S-S мостик.

28. Иммуноцитокин по п.25, где константный домен легкой цепи антитела выбирают из CK или CL.

29. Иммуноцитокин по п.25, где IL-15Rα имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 9.

30. Иммуноцитокин по п.25, где IL-15 имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 10.

31. Иммуноцитокин по п.25, где IL-15Rα связан с константным доменом легкой цепи антитела.

32. Иммуноцитокин по п. 31, где IL-15Rα, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 19.

33. Иммуноцитокин по п. 25, где IL-15 связан с константным доменом легкой цепи антитела.

34. Иммуноцитокин по п. 33, где IL-15, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 21.

35. Иммуноцитокин по п. 25, где первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи, соединены через шарнир.

36. Иммуноцитокин по п. 25, где IL-15 или IL-15Rα связан с константными доменами тяжелой цепи антитела, идущими в следующем порядке CH1-шарнир-CH2-CH3.

37. Иммуноцитокин по п. 36, где IL-15Rα связан с константными доменами тяжелой цепи антитела.

38. Иммуноцитокин по п. 37, где IL-15Rα, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 24.

39. Иммуноцитокин по п. 36, где IL-15 связан с константными доменами тяжелой цепи антитела.

40. Иммуноцитокин по п. 39, где IL-15, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 23.

41. Иммуноцитокин по п. 25, где иммуномодулирующее антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически ингибируют PD-1 путь, представляет собой антитело, которое специфически связывается с PD-1.

42. Иммуноцитокин по п. 41, где иммуномодулирующее антитело включает:

а) легкую цепь, содержащую вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи;

б) тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи и константные домены тяжелой цепи антитела, включающие первый (CH1) константный домен тяжелой цепи и мономер Fc-фрагмента, содержащий второй (CH2) и третий (CH3) константные домены тяжелой цепи.

43. Иммуноцитокин по п. 42, где вариабельный домен легкой цепи включает LCDR 1, 2 и 3 (гипервариабельные участки 1, 2 и 3), которые соответственно представлены аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16.

44. Иммуноцитокин по п. 43, где вариабельный домен легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 18.

45. Иммуноцитокин по п. 42, где вариабельный домен тяжелой цепи включает HCDR 1, 2 и 3 (гипервариабельные участки 1, 2 и 3), которые соответственно представлены аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13.

46. Иммуноцитокин по п. 45, где вариабельный домен тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 17.

47. Иммуноцитокин по п. 42, где

1) вариабельный домен легкой цепи включает LCDR 1, 2 и 3 (гипервариабельные участки 1, 2 и 3), которые соответственно представлены аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 16;

2) вариабельный домен тяжелой цепи включает HCDR 1, 2 и 3 (гипервариабельные участки 1, 2 и 3), которые соответственно представлены аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13.

48. Иммуноцитокин по п. 47, где

1) вариабельный домен легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 18;

2) вариабельный домен тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 17.

49. Иммуноцитокин по п. 42, где иммуномодулирующее антитело включает легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 8.

50. Иммуноцитокин по п. 42, где иммуномодулирующее антитело включает тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 7.

51. Иммуноцитокин по п. 42, где иммуномодулирующее антитело включает:

тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 7;

легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 8.

52. Иммуноцитокин по п. 25, где иммуномодулирующее антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически ингибируют PD-1 путь, представляет собой антитело, которое специфически связывается с PD-L1.

53. Иммуноцитокин по п.25, где

а) гетеродимерный белковый комплекс на основе IL-15 и IL-15Rα содержит:

IL-15, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 23;

б) иммуномодулирующее антитело включает:

тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 7;

легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 8.

54. Иммуноцитокин по п.25, где

а) IL-15Rα, связанный с константными доменами тяжелой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 24, а

IL-15, связанный с константным доменом легкой цепи антитела, имеет аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 21;

б) иммуномодулирующее антитело включает:

тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 7;

легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая представлена SEQ ID NO: 8.

55. Иммуноцитокин по любому из пп. 25 или 42, имеющий мутации в константных доменах антитела, обуславливающие гетеродимеризацию двух разных частей, одна из которых включает ковалентно или нековалентно ассоциированные IL-15Rα, связанный с константными доменами антитела, и IL-15, связанный с константным доменом антитела, а другая включает ковалентно или нековалентно ассоциированные легкую и тяжелую цепи антитела.

56. Иммуноцитокин по любому из пп. 25 или 42, где первый мономер Fc и второй мономер Fc выбраны из группы: первый мономер Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Knob, а второй мономер Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Hole, или когда второй мономер Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Knob, а первый мономер Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Hole.

57. Иммуноцитокин по п. 56, где первый мономер Fc имеет аминокислотные замены S354C/T366W, а второй мономер Fc имеет аминокислотные замены Y349C/T366S/L368A/Y407V.

58. Иммуноцитокин по п. 56, где первый мономер Fc имеет аминокислотные замены Y349C/T366S/L368A/Y407, а второй мономер Fc имеет аминокислотные замены S354C/T366W.

59. Иммуноцитокин по любому из пп. 25 или 42, где Fc-фрагмент относится к IgG.

60. Иммуноцитокин по п.59, где изотип Fc-фрагмента выбирают из группы: IgG1, IgG2 или IgG4 человека.

61. Иммуноцитокин по любому из пп. 25 или 42, имеющий мутации в мономере Fc-фрагмента, приводящие к отсутствию ADCC, CDC и/или ADCP свойств у указанного иммуноцитокина.

62. Иммуноцитокин по любому из пп. 25-61 для лечения онкологического или аутоиммунного заболевания.

63. Иммуноцитокин по п. 62 для лечения онкологического заболевания.

64. Выделенная нуклеиновая кислота, которая кодирует иммуноцитокин по любому из пп. 1-22.

65. Нуклеиновая кислота по п. 64, где нуклеиновая кислота представляет собой ДНК.

66. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп. 64, 65.

67. Способ получения клетки-хозяина для получения иммуноцитокина по любому из пп. 1-22, включающий трансформирование клетки вектором по п. 66.

68. Клетка-хозяин для получения иммуноцитокина по любому из пп. 1-22, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 64, 65.

69. Способ получения препарата, содержащего иммуноцитокин по любому из пп. 1-22, заключающийся в культивировании клетки-хозяина по п. 68 в культуральной среде, при необходимости, с последующим выделением и очисткой полученного иммуноцитокина.

70. Фармацевтическая композиция для стимулирования активации и/или пролиферации IL-15Rбета/гамма-положительных клеток, содержащая иммуноцитокин по любому из пп. 1-22 в терапевтически эффективном количестве в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

71. Фармацевтическая композиция по п. 70 для лечения онкологического или аутоиммунного заболевания.

72. Фармацевтическая композиция по п. 71 для лечения онкологического заболевания.

73. Фармацевтическая композиция по п. 72, где онкологическое заболевание выбирают из группы: ПРГШ (плоскоклеточный рак головы и шеи), рак шейки матки, рак без выявленного первоисточника, глиобластома, рак пищевода, рак мочевого пузыря, ТНРМЖ (трижды негативный рак молочной железы), КРР (колоректальный рак), гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, НМРЛ (немелкоклеточный рак легкого), рак почки, рак яичника, MSI КРР (колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью), лейкоз (острый или миелобластный), лимфома, множественная миелома, меланома, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, саркома, гепатоцеллюлярная карцинома, глиобластома, лимфома Ходжкина, T- и B-клеточный острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточный рак лёгкого, острый миелобластный лейкоз, рефрактерная В-клеточная неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, крупноклеточная В-клеточная диффузная лимфома, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак яичника, острый миелобластный лейкоз и миелодиспластический синдром высокого риска.

74. Способ лечения онкологического заболевания, включающий введение субъекту иммуноцитокина по любому из пп. 1-22 или фармацевтической композиции по п. 70, нуждающемуся в таком лечении, в терапевтически эффективном количестве.

75. Способ лечения по п.74, где онкологическое заболевание выбрано из группы: ПРГШ (плоскоклеточный рак головы и шеи), рак шейки матки, рак без выявленного первоисточника, глиобластома, рак пищевода, рак мочевого пузыря, ТНРМЖ (трижды негативный рак молочной железы), КРР (колоректальный рак), гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, НМРЛ (немелкоклеточный рак легкого), рак почки, рак яичника, MSI КРР (колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью), лейкоз (острый или миелобластный), лимфома, множественная миелома, меланома, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, саркома, гепатоцеллюлярная карцинома, глиобластома, лимфома Ходжкина, T- и B-клеточный острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточный рак лёгкого, острый миелобластный лейкоз, рефрактерная В-клеточная неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, крупноклеточная В-клеточная диффузная лимфома, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак яичника, острый миелобластный лейкоз и миелодиспластический синдром высокого риска.

76. Способ активации биологической активности T-клеточной популяции или NK-клеточной популяции у субъекта, нуждающегося в такой активации, включающий введение субъекту эффективного количества иммуноцитокина по любому из пп. 1-22 или фармацевтической композиции по п. 70.

77. Применение иммуноцитокина по любому из пп. 1-22 для лечения у субъекта, нуждающегося в таком лечении, онкологического заболевания.

78. Применение по п. 77, где онкологическое заболевание выбрано из группы: ПРГШ (плоскоклеточный рак головы и шеи), рак шейки матки, рак без выявленного первоисточника, глиобластома, рак пищевода, рак мочевого пузыря, ТНРМЖ (трижды негативный рак молочной железы), КРР (колоректальный рак), гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, НМРЛ (немелкоклеточный рак легкого), рак почки, рак яичника, MSI КРР (колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью), лейкоз (острый или миелобластный), лимфома, множественная миелома, меланома, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, саркома, гепатоцеллюлярная карцинома, глиобластома, лимфома Ходжкина, T- и B-клеточный острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточный рак лёгкого, острый миелобластный лейкоз, рефрактерная В-клеточная неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, крупноклеточная В-клеточная диффузная лимфома, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак яичника, острый миелобластный лейкоз и миелодиспластический синдром высокого риска.

Изобретение "ИММУНОЦИТОКИН, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛКОВЫЙ КОМПЛЕКС НА ОСНОВЕ IL-15/IL-15Rα, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ" (Улитин Андрей Борисович, Кононов Алексей Владимирович, Агеев Сергей Андреевич, Гордеев Александр Андреевич, Виноградова Елена Владимировна, Евдокимов Станислав Рудольфович, Шмакова Александра Павловна, Митрошин Иван Владимирович, Морозов Дмитрий Валентинович) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога

L международная выставка-презентация
научных, технических, учебно-методических и литературно-художественных изданий