ПРОТИВОЭНТЕРОВИРУСНОЕ И ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО

Название	ПРОТИВОЭНТЕРОВИРУСНОЕ И ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО
Разработчик (Авторы)	АРТАМОНОВ АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ, БЕКАРЕВ АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ, БАЛДАНОВ НИКОЛАЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ, КИНШТ ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ, МАДОНОВ ПАВЕЛ ГЕННАДЬЕВИЧ, МИРОШНИКОВ ПАВЕЛ НИКОЛАЕВИЧ, ДЫГАЙ АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ, ДАНИЛЕЦ МАРИНА ГРИГОРЬЕВНА, ЛИГАЧЕВА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА, МАСНАЯ НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА, ТРОФИМОВА ЕВГЕНИЯ СЕРГЕЕВНА, ШЕРСТОБОЕВ ЕВГЕНИЙ ЮРЬЕВИЧ, ШИТИКОВА ОЛЬГА ГЕННАДЬЕВНА
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2554761
Дата регистрации	27.06.2015
Правообладатель	Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии"
Область применения (класс МПК)	A61K 9/48 (2006.01) A61K 38/21 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) A61P 31/12 (2006.01) A61P 37/02 (2006.01)

Описание изобретения

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, подавляющих размножение энтеровирусов и стимулирующих иммунную систему.

В последние годы в мире наметилась четкая тенденция активизации энтеровирусной инфекции, о чем свидетельствуют постоянно регистрируемые в разных странах эпидемиологические подъемы заболеваемости и вспышки. Энтеровирусная инфекция остается малоконтролируемой в практике здравоохранения и занимает одно из ведущих мест среди инфекционных заболеваний, протекающих с поражением ЦНС. Одной из основных особенностей этих инфекций является вирусоносительство, постоянно обусловливающее возникновение спорадических форм и массовых заболеваний, которое, как и заболеваемость, наблюдается не только среди детей младшего и старшего возраста, но и среди взрослых.

В качестве специфической терапии энтеровирусной инфекции применяют: лейкоцитарный интерферон, рекомбинантные интерфероны (виферон, реаферон, роферон), интерфероногены (циклоферон, неовир), иммуноглобулины для внутривенного введения (сандоглобулин, пентаглобин).

Наряду с высокой клинической эффективностью интерферонов (ИФН) при их применении часто наблюдаются побочные эффекты в виде гриппоподобного синдрома, артралгии, депрессивных состояний, диареи, галлюцинаций, кожных высыпаний, аллергии, заболеваний кроветворной системы, выпадения волос [1, 2]. У 30% больных при длительном применении больших доз рекомбинантных интерферонов образовывались нейтрализующие антивирусную активность препарата антитела, что сопровождалось развитием резистентности к рекомбинантным интерферонам [3].

Поэтому актуальной задачей является разработка новых подходов к терапии вирусных, и, в частности, энтеровирусных инфекций с целью уменьшения побочных эффектов. Одним из таких подходов является иммобилизация интерферонов на веществе-матрице, что позволяет уменьшить дозы и частоту введения лекарственных препаратов, защищает ткани от их раздражающего действия. Получил известность способ присоединения молекул полиэтиленгликоля (ПЭГ) к интерферону химическим путем (пегилирование). В настоящее время во всем мире, в том числе и в России, применяется два вида пегилированного интерферона:

1. Пегилированный интерферон альфа-2b (ПегИнтрон, фирма «Schering-Plough», США).

2. Пегилированный интерферон альфа-2а (Пегасис, фирма «Roche», Швейцария).

Оба пегилированных интерферона (патент №5951974 USA от 14.09.1999 «Interferon polymer conjugates» - препарат «ПегИнтрон» и патент № ЕР 0809996 В1 от 02.04.2003 «Interferon-alpha polypeptides and conjugates» - препарат «Пегасис») используются для лечения хронического гепатита С. Однако применение пегилированных интерферонов имеет ряд недостатков: парентеральный путь введения препаратов; побочные эффекты в виде повышения температуры тела, слабости, головных болей, артралгий и др.; невозможность точно контролировать концентрацию интерферона в крови, т.к. препарат вводится раз в неделю. Немаловажен тот факт, что стоимость лекарства весьма высока. Кроме того, производство пегилированных препаратов многоэтапное, на некоторых стадиях используются токсические вещества, полная очистка от которых влечет снижение активности препарата, что приводит к увеличению дозировки.

Вместе с тем известна технология иммобилизации белков с помощью ионизирующего излучения, так называемый, физический способ (патент RU №2409669, «Способ иммобилизации биологически активного вещества (БАВ) на носитель (варианты) и конъюгат БАВ-носитель, полученный данными способами», опубл. 27.02.2010). По этому способу в качестве БАВ использовали вещества, выбранные из группы: инсулин, проинсулин, Г-КСФ, гиалуронидаза, тирозил-2-аланил-глицил-фенилаланил-лейцил-аргинина диацетат, соматотропин.

Физический способ связывания рекомбинантного интерферона с веществом-матрицей позволит защитить белковую молекулу интерферона от действия протеолитических ферментов и тем самым обеспечит возможность его перорального применения без потери фармакологической активности и терапевтической эффективности.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка препарата интерферона для лечения энтеровирусной инфекции при пероральном способе применения. Использование препарата позволит: 1) адресно доставлять иммобилизированный интерферон непосредственно к вирусинфицированным клеткам слизистой оболочки кишечника; 2) влиять на клетки лимфоидной ткани (макрофаги, нейтрофилы), ассоциированной со слизистой кишечника; 3) снизить дозировку интерферона при однократном его введении; 4) устранить побочные эффекты, характерные для парентерального введения препаратов интерферонов, что обеспечит возможность применения препаратов интерферона не только для лечения взрослых, но и в педиатрической и акушерской практике.

Поставленная задача достигается использованием иммобилизированного интерферона альфа-2b в качестве противоэнтеровирусного и иммуностимулирующего средства, полученного путем смешивания облученного потоком ускоренных электронов водного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ), молекулярной массы 1,5 кДа и раствора интерферона альфа-2b до конечной концентрации 10 мг в 1 мл. Смесь перемешивают до получения опалесцирующего раствора.

Применение полиэтиленгликоля в качестве основы позволяет защитить белковую молекулу интерферона от действия протеолитических ферментов и тем самым обеспечивает возможность его перорального применения. Выход готового продукта составляет 98%, активность препарата не менее 1×106 международных единиц (МЕ)/мл, молекулярная масса не менее 19,5±0,5кДа. Лекарственная форма иммобилизированного интерферона альфа-2b - твердая желатиновая капсула с крышечкой, размера «00».

Состав на 1 капсулу:

Активное вещество:

интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный иммобилизированный - 1000000 МЕ/капс.

Вспомогательные вещества:

Новым в предлагаемом изобретении является то, что иммобилизированный на ПЭГ интерферон альфа-2b впервые предложен для применения в качестве противоэнтеровирусного и иммуностимулирующего средства для перорального введения.

Из отечественных препаратов интерферонов применяемых внутрь единственным препаратом является «Реаферон-ЕС-липинт» (прототип) (ЗАО «Вектор-Медика», Новосибирск) - липосомальный препарат интерферона альфа-2b (патент RU №2123328, «Липосомальное противовирусное лекарственное средство для перорального применения», опубл. 20.12.1998). Указанное липосомальное лекарственное средство имеет недостаточный срок хранения (активность интерферона альфа-2 практически на постоянном уровне сохраняется не более 12 месяцев) и при его применении отмечается ряд побочных эффектов: гриппоподобное состояние; тошнота, рвота, поносы; нарушение картины крови и функции печени; головокружение, сонливость; снижение или повышение артериального давления, аритмии.

Сходным действием обладает препарат «Виферон» (ООО «Ферон», Москва) - суппозитории, в состав которых помимо рекомбинантного интерферона альфа-2b входят витамины Е и С (патент RU №2024253, «Ректальные свечи и устройство для введения ректальных свечей в полость организма» опубл. 15.12.1994). Ректальное применение «Виферона» способствует более длительной циркуляции интерферона в крови, чем при внутривенном или внутримышечном введении препаратов рекомбинантных интерферонов. Однако применение ректальных свечей неудобно, негигиенично, интерферон в свечах «Виферон» содержится в небольшой дозировке, использование свечей «Виферон» может приводить к местному раздражению при применении препарата у маленьких детей.

Применение иммобилизированного на ПЭГ интерферона стало возможным благодаря обнаружению у него способности подавлять репликацию энтеровирусов различных штаммов in vitro. Выявлено наличие иммунотропных свойств, а именно стимуляция гуморального иммунного ответа и фагоцитарных реакций при пероральном введении лабораторным животным, а также усиление спонтанной и стимулированной выработки интерлейкина 2 (ИЛ-2) и ИФН-γ без дополнительной стимуляции митогеном при добавлении иммобилизированного интерферона in vitro. Применение иммобилизированного на ПЭГ интерферона для перорального введения в качестве противоэнтеровирусного и иммуностимулирующего средства в литературе не описано и явным образом не вытекает из уровня техники для специалиста. Иммобилизированный интерферон можно будет использовать для применения у больных с энтеровирусной инфекцией, в том числе ассоциированной с иммунной недостаточностью.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Противовирусные свойства иммобилизированного на ПЭГ интерферона альфа-2b были обнаружены благодаря экспериментальным исследованиям. Было проведено изучение противовирусной активности лекарственного средства на основе иммобилизированного интерферона альфа-2b в отношении вируса Коксаки А7 (штамм ЖЭВ-8) и вируса Коксаки В6 (штамм ЖЭВ-15) на культуре клеток RD (рабдомиосаркома человека). Культура клеток RD является адекватной моделью для исследования противовирусной активности интерферона [9]. Для исследования противовирусной активности была использована схема с преинкубацией клеток RD с различными концентрациями рекомбинантного интерферона альфа-2b и исследуемого лекарственного средства основе иммобилизированного интерферона альфа-2b (оба производства ЗАО «Сибирский центр фармакологии и биотехнологии», Новосибирск). Разведения препаратов интерферона на культуральной среде Игла-ДМЕМ добавляли к клеткам культивированным в стандартных 96-луночных культуральных микропланшетах за 6 часов до инфицирования [9]................

Формула изобретения

Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство для перорального применения в виде капсул, содержащее интерферон и вспомогательные вещества, отличающееся тем, что в качестве лекарственного вещества содержит интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, иммобилизированный на полиэтиленгликоле молекулярной массой 1,5 кДа с помощью физического способа связывания потоком ускоренных электронов в дозе 1,5 Мрад при следующем соотношении компонентов на капсулу:

ИЗВЕЩЕНИЯ

Изобретение "ПРОТИВОЭНТЕРОВИРУСНОЕ И ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО" (АРТАМОНОВ АНДРЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ, БЕКАРЕВ АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ, БАЛДАНОВ НИКОЛАЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ, КИНШТ ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ, МАДОНОВ ПАВЕЛ ГЕННАДЬЕВИЧ, МИРОШНИКОВ ПАВЕЛ НИКОЛАЕВИЧ, ДЫГАЙ АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ, ДАНИЛЕЦ МАРИНА ГРИГОРЬЕВНА, ЛИГАЧЕВА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА, МАСНАЯ НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА, ТРОФИМОВА ЕВГЕНИЯ СЕРГЕЕВНА, ШЕРСТОБОЕВ ЕВГЕНИЙ ЮРЬЕВИЧ, ШИТИКОВА ОЛЬГА ГЕННАДЬЕВНА ) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога