L международная выставка-презентация
научных, технических, учебно-методических и литературно-художественных изданий
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ТАЗОВОГО АБСЦЕССА НА САМКАХ КРЫС
| Название | СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ТАЗОВОГО АБСЦЕССА НА САМКАХ КРЫС |
|---|---|
| Разработчик (Авторы) | Полиданов М.А., Капралов С.В., Петрунькин Р.П., Кашихин А.А., Волков К.А., Масляков В.В., Марченко В.С., Дубровская М.А., Дягель А.П., Амиров Э.В., Бугаенко М.А., Якубенко В.В. |
| Вид объекта патентного права | Изобретение |
| Регистрационный номер | 2841900 |
| Дата регистрации | 18.06.2025 |
| Правообладатель | Полиданов М.А., Капралов С.В., Петрунькин Р.П., Кашихин А.А., Волков К.А., Масляков В.В., Марченко В.С., Дубровская М.А., Дягель А.П., Амиров Э.В., Бугаенко М.А., Якубенко В.В. |
| Область применения (класс МПК) | A61K 35/74 (2015.01) A61P 43/00 (2006.01) G09B 23/28 (2006.01) |
Описание изобретения
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к гинекологии. Самке крысы в прямокишечно-маточное углубление инсулиновым шприцом вводят 1 мл суспензии стафилококка и кишечной палочки с микробной нагрузкой 5×105 КОЕ/мл и выдерживают до 5 дней. Способ обеспечивает малотравматичное моделирование тазового абсцесса в более упрощенном виде при сокращенных сроках. 3 ил., 1 табл., 1 пр.
Область техники
Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине, и может быть использовано в научных исследованиях для моделирования тазового абсцесса на самках крыс, в поиске новых эффективных способов его лечения, а также в ходе биомедицинских исследований у лабораторных животных.
Уровень техники
Тазовый абсцесс (абсцесс Дугласового пространства) представляет собой отграниченное скопление гноя в самом нижнем отделе брюшной полости - прямокишечно-пузырном углублении (excavatio rectovesicalis) у мужчин и прямокишечноматочном углублении (excavatio rectouterina) у женщин.
Известен способ моделирования абсцессов мягких тканей (см. Шалимов С.А., Радзинский А.П., Кейсевич А.В. Руководство по экспериментальной хирургии. М.: Медицина. - 1989. - 272 с.), в котором после обработки у самок-крыс кожи в подкожную клетчатку вводили 1-1,5 мл скипидара. Через несколько часов происходило формирование абсцесса, затем в полученную полость вводили 2-4×105КОЕ Staphylococcus aureus.
Недостатком этого способа является то, что введенный в подкожную клетчатку скипидар не создает отграниченную полость, а распространяется по подкожному пространству, и введение возбудителя моделирует гнойную распространенную рану, а не абсцесс.
Известен способ с использованием катетера с раздувным баллоном (катетер Фогерти) (см. Урусова А.И., Андреев Д.А., Кадышев А.В. Моделирование абсцесса мягких тканей. Бюллетень медицинских интернет-конференций. - 2016. - Т. 6. - № 5. - С. 1045). В данном способе определяют участок кожи в безопасной зоне моделируемого абсцесса, затем проводят депиляцию и обработку антисептиком, анестезируют лабораторное животное. Производят пункцию подкожного пространства иглой Дюфо, через которую вводят модифицированный катетер Фогерти и раздувают баллон в объёме 2 мл раствором 0,9% NaCl. Через 3 суток после установления катетера баллон опорожняют и удаляют катетер, а в полученную полость вводят суспензию инфекционного агента.
Недостаток данного способа заключается в технических сложностях при моделировании абсцесса под местной анестезией: трудно добиться фиксации животного, возможны ошибки при введении патогена. Также сложно соблюдать симметричность введения патогена - инфильтрат оказывается смещён по одну сторону от оси средней линии тела.
Известен способ моделирования отграниченного перитонита у нелинейных лабораторных мышей (см. патент RU 2567602, МПК G09B23/28, опубл. 10.11.2015), включающий однократное внутрибрюшинное введение каловой взвеси. Мышей массой 20-22 г инфицируют 10% каловой взвесью из свежих крысиных фекалий, приготовленной на изотоническом растворе хлорида натрия и однократно профильтрованной через двойной слой марли, через одну точку вкола по средней линии в пупочной области живота на глубину 2 мм, в дозах 0,3-0,4 мл - для использования модели более 13 дней и 0,5 мл - для использования модели не более 13 дней. Способ позволяет получать образование отграниченных абсцессов в нескольких анатомических областях брюшной полости.
Однако представленный способ сложен в воспроизведении ввиду большого временного промежутка реализации и техники исполнения.
Известен способ моделирования местного отграниченного перитонита у крыс (см. патент RU 2714949, МПК G09B23/28, опубл. 21.02.2020), который включает введение в брюшную полость животного 15%-ной взвеси фекалий в изотоническом растворе хлорида натрия из расчета 1 миллилитр на 100 граммов массы животного. Предварительно под контролем УЗИ в правую подвздошную область живота крысы через троакар проводят модифицированный катетер Фолея. После заполнения его баллона производят перевязку и фиксацию дистальной части катетера при помощи кожной дупликатуры. В образовавшуюся полость вводят возбудитель инфекционного процесса.
Недостатком данного способа является формирование сначала асептической, а затем уже гнойной полости, что представляет собой наличие дополнительных манипуляций для формирования гнойной полости (введение возбудителя после формирования полости) и не позволяет гнойному процессу образовываться постепенно в течение времени, что сказывается негативно на общем состоянии животного.
Известен способ моделирования острого перитонита (см. патент RU 2151427, МПК G09B23/28, A61M25/01, опубл. 20.06.2000), заключающийся в пункционном введении в брюшную полость патогенной микрофлоры. Бактериальное загрязнение брюшной полости осуществляется комбинированной взвесью микробных тел, представленной стафилококками, кишечной палочкой, палочкой сине-зеленого гноя и пептококками в равных соотношениях, которая распределяется по всем отделам брюшной полости с помощью предварительно проведенных через пункционные отверстия в передней брюшной стенке катетеров, установленных в правом и левом поддиафрагмальных пространствах, правом и левом боковых каналах - живота, малом тазу, и центральной части брюшной полости. При этом указанная взвесь микробных тел вводится через 24 ч после предварительного введения в брюшную полость через указанные катетеры аутокрови в суммарном объеме 7-10 мл/кг массы тела экспериментального животного в три этапа, при этом на первом этапе взвесь микробных тел вводится в объеме 50-55 млрд микробных тел/кг массы тела животного, на втором и третьем - по 20-25 млрд микробных тел/кг через 6-часовые промежутки.
Однако представленный способ сложен в воспроизведении ввиду большого временного промежутка реализации и техники исполнения.
Наиболее близким к заявляемому является способ моделирования хронического воспаления эндометрия (см. патент RU 2580986, МПК G09B 23/28, C1, опубл. 10.04.2016). Согласно способу крысе в маточный рог вводят 0,1 мл взвеси аутокала. Взвесь получают смешиванием аутокала с физиологическим раствором в пропорции 1:10 и двойным фильтрованием смеси сквозь марлевый стерильный материал. Начиная с третьих суток после вмешательства, проводят в течение 7 суток антибактериальную терапию препаратом широкого спектра действия. Устанавливают формирование хронического воспаления эндометрия с 41 суток эксперимента.
Недостатком способа является то, что приведенные методы моделирования подразумевают работу с изолированной бактериальной культурой, что технологически сложно и требует специального оснащения для отбора.
Раскрытие сущности изобретения
Технической проблемой изобретения является разработка способа, наиболее приближенного к клиническому течению тазового абсцесса, представляющего собой отграниченное скопление гноя в прямокишечно-маточном углублении.
Технический результат заключается в обеспечении воспроизводимости моделирования при сокращенных сроках и в более упрощенном виде.
Технический результат достигается тем, что в способе моделирования тазового абсцесса на самках крыс, включающем введение шприцом в нижний этаж полости брюшины крысы, находящейся под наркозом, возбудителя патологического процесса, согласно решению, самке крысе в прямокишечно-маточное углубление инсулиновым шприцом вводят суспензию стафилококка и кишечной палочки с микробной нагрузкой 5×105 КОЕ/мл в 1 мл и выдерживают в течение 5 дней.
Краткое описание чертежей
Изобретение поясняется чертежами, где на фиг. 1 показан микробиологический пейзаж контрольных высевов Staphylococcus aureus 5,0±0,1*109 КОЕ/мл из полости тазового абсцесса на 5-е сутки; на фиг. 2 показан микробиологический пейзаж контрольных высевов Escherichia coli 5,0±0,1*109 КОЕ/мл из полости тазового абсцесса на 5-е сутки; на фиг. 3 показаны результаты морфологического исследования места абсцесса животных на 5-е сутки, окраска: гематоксилин-эозин, на фиг. 4 приведена таблица, в которой отражены результаты анализов микробиологических данных и изменение объема полости сформированного тазового абсцесса на всех 20 крысах.
Позициями на чертежах обозначено:
1 - стенка тазового абсцесса;
2 - полость тазового абсцесса.
Осуществление изобретения
Способ осуществляется следующим образом.
Исследования проводились на 20 лабораторных крысах-самках породы «стандарт» массой 200±50 г. Все манипуляции и содержание животных было регламентировано этической комиссией ФГБОУ ВО «Саратовского государственного медицинского университета им. В.И. Разумовского» Министерства Здравоохранения Российской Федерации (протокол № 2, 10.02.2024). Условия содержания в виварии лабораторных животных регламентированы РД-АПК 3.10.07.02-09 «Методические рекомендации по содержанию лабораторных животных в вивариях научно-исследовательских институтов и учебных заведений», приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 г. № 199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики», ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами» (актуализированным от 01.01.2021).
По стандартной методике проводят общую анестезию лабораторных животных - самок крыс. Затем осуществляют депиляцию и антисептическую обработку промежности. После чего инсулиновым шприцом 1 мл (до 100 единиц) путем прокола производят введение инфицированной суспензии стафилококка и кишечной палочки с микробной нагрузкой 5×105 КОЕ/мл в 1 мл в нижний этаж полости брюшины крысы, в прямокишечно-маточное углубление. Выдерживают 5 дней и проводят лапаротомию, осуществляют забор материала для бактериологического исследования, а также берут фрагмент абсцедированной ткани для морфологического исследования.
Исследования показали, что через 3-е суток после введения инфицированной суспензии стафилококка и кишечной палочки с микробной нагрузкой 5×105 КОЕ/мл в 1 мл в прямокишечно-маточное углубление стенки полости недостаточно образованы, и абсцесс не был сформирован. На 5-е сутки был сформирован тазовый абсцесс, который отвечал всем требованиям отграниченного абсцесса. Макроскопическое описание: фрагмент стенки матки размером 3±0,5 × 2±0,5 см3, серо-желтого цвета, мягкой консистенции, с наличием желтоватого содержимого, анализ микробиологических данных которого показал, что у всех 20 лабораторных животных из сформированной полости тазового абсцесса 2 на 5 сутки высевается полиштамм Staphylococcus aureus и Escherichia coli 5,0±0,1*109 КОЕ/мл (фиг. 1-2), а при морфологическом исследовании была выявлена диффузная смешанно-клеточная инфильтрация: воспалительный инфильтрат содержит лимфоциты, плазматические клетки и гистиоциты с преобладанием нейтрофилов. Мышечный слой матки отечный и содержит рассеянные нейтрофилы, стенки тазового абсцесса хорошо выражены 1. Были обнаружены участки гнойного расплавления ткани. Стенки сосудов расширены, с признаками тромбоза. В некоторых участках наблюдаются скопления грамположительных кокков, а также грамотрицательных палочковидных микроорганизмов (фиг. 3).
Таким образом, тазовый абсцесс моделируется в срок 5 суток от проведения эксперимента у 100% животных и имеет выраженные морфологические (макро- и микроскопические) признаки, подтверждаемые микробиологическими данными (фиг. 4).
Заявляемый способ является малотравматичным, обеспечивает гарантированное формирование тазового абсцесса и не требует каких-либо сложных манипуляций и высокого технического оснащения, обеспечивает срок формирования абсцесса до 5 дней.
Формула изобретения
Способ моделирования тазового абсцесса на самках крыс, включающий введение шприцом в нижний этаж полости брюшины крысы, находящейся под наркозом, возбудителя патологического процесса, отличающийся тем, что самке крысы в прямокишечно-маточное углубление инсулиновым шприцом вводят 1 мл суспензии стафилококка и кишечной палочки с микробной нагрузкой 5×105 КОЕ/мл и выдерживают до 5 дней.
Медаль Альфреда Нобеля