ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ

Название	ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
Разработчик (Авторы)	Ерофеевская Л.А.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2482179
Дата регистрации	16.04.2012
Правообладатель	Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук
Медаль имени А.Нобеля

Описание изобретения

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки воды и почвы от нефти.

Известны штаммы Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Micrococcus flavus (SU 1493666), Flavobacterium tirrennicum (SU 1409594), которые осуществляют деструкцию нефтепродуктов в воде, но не способны осуществлять очистку почвы от нефти.

Известны штаммы Acinetronacter sp. НВ-1 (RU 2077579); Acinetronacter sp. JN-2 (RU 2064017), Pseudomonas alcaligenes E7 (RU 2134723), Pseudomonas putida 36 (SU 1076446), пригодные для очистки почвы от нефти, но процесс утилизации резко замедляется при понижении температуры ниже 20°C, что затрудняет их использование в условиях Севера.

Большую эффективность в условиях низких положительных температур показал штамм Rhodococcus erythroplis Е-15 (RU 2019527), но процесс биодеградация нефти протекает медленно и только при добавлении нитроаммофоски или нитроаммофоски и натриевой селитры.

Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам.

Поставленная задача решена тем, что получен штамм Bacillus atropheus IPNG-ELA-2, обладающий утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам, который может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в широком диапазоне температур (от +8 до +30°C).

Штамм бактерий Bacillus atropheus IPNG-ELA-2 выделен из нефтезагрязненной почвы территории Филиала Амгинской нефтебазы (п.Амга, Амгинский район, Республика Саха Якутия) с глубины 10 см.

Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика (ВКПМ) (Москва, 1-ый Дорожный пр., д.1) под регистрационным номером ВКПМ В-10592.

Полученный штамм характеризуется следующими признаками.

Морфолого-культуральные признаки.

Грамположительные споровые палочки, размером 0,8-1,5 мкм, образующие центрально расположенные эндоспоры, располагаются поодиночке или короткими цепочками.

На мясопептонном агаре (масс.%: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, pH 7,0-7,2) с добавлением 1% глюкозы растет в виде крупных, плоских, матовых бежевого цвета колоний, диаметр которых составляет 0,3-6,0 см. Край колоний слабоволнистый, с мелкими развитыми складками в центральной верхней части. Через несколько дней (3-4) колонии выделяют в питательный субстрат коричневый пигмент. В старых культурах колонии также окрашиваются в темный (коричневый) цвет.

На среде Сабуро (масс.%: гидролизат рыбной муки - 1,0; панкреатический гидролизат казеина - 1,0; дрожжевой экстракт - 0,2; натрия фосфат однозамещенный - 0,2; D-глюкоза - 4,0; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное; pH 6,0±3) образует крупные округлые морщинистые колонии кремового или грязно-белого цвета, максимальный диаметр которых составляет 1,5 см.

Штамм растет на минеральной среде Мюнца с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо) следующего состава: (масс.%) KNO₃ - 0,4; MgSO₄·7H₂O - 0,08; NaCl - 0,1; KH₂HPO₄ - 0,14; KH₂PO₄ - 0,06; агар - 2,0; нефть или дизельное топливо - 1,0; вода дистиллированная - остальное, pH - 7,2, в виде суховатых непрозрачных матовых колоний, диаметром 1-3 мм, кремового или грязно-белого цвета.

В мясопептонном бульоне (масс.%: ферментативный пептон - 1,0, натрий хлористый - 0,5, вода мясная - остальное; pH 7,0-7,2) растет в виде морщинистой пленки поверх бульона.

Физиолого-биохимические признаки

Штамм растет при температуре от +8 до +37°C, в аэробных условиях. В анаэробных условиях штамм сразу не погибает, но развивается медленнее. Оптимум роста +30°C. Растет при pH 6,0-8,0. Растет в солевом бульоне с добавлением 0,1-2,0% NaCl. Обладает каталазной активностью. Гидролизует желатину и казеин. Лецитиназу не образует. Не гидролизует крахмал. Окисляет глицерол, гликоген, салицин. Не ферментирует D-арабинозу, инулин, маннитол.

Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).

Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном мясопептонном агаре или на минеральной среде с нефтью и нефтепродуктами или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при 4°C.

Для хранения штамма можно также использовать метод иммобилизации суспензии микроорганизмов на поверхность цеолитовой крошки фракцией 1,0-3,0 мм. Иммобилизованные микроорганизмы хранят при температуре +4°C в холодильнике в течение 24 месяцев. Контрольные пересевы проводят 4 раза в год (каждые 3 месяца), предварительно эмульгируя фракции цеолита с иммобилизованными бактериями в стерильной дистиллированной воде (1 г цеолитовой крошки с иммобилизованными микроорганизмами на 9 мл стерильной воды). Посев проводят в чашки Петри на поверхность 3% МПА.

Таким образом, заявляемый штамм достаточно быстро утилизирует нефть и нефтепродукты, в частности дизельное топливо, в воде и почве в широком диапазоне температур (от +8 до +30°C).

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus atropheus ВКПМ В-10592 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Изобретение "ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus atropheus - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ" (Ерофеевская Л.А.) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога