ШТАММ БАКТЕРИЙ Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ

Название	ШТАММ БАКТЕРИЙ Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
Разработчик (Авторы)	Ерофеевская Л.А.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2484130
Дата регистрации	16.04.2012
Правообладатель	Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук
Медаль имени А.Нобеля

Описание изобретения

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано при очистке почвы и поверхностных вод при попадании в окружающую среду нефти и нефтепродуктов (дизельное топливо).

Известны штаммы Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Micrococcus flavus (SU 1493666), Flavobacterium tirrennicum (SU 1409594), которые осуществляют деструкцию нефтепродуктов в воде, но не способны осуществлять очистку почвы от нефти.

Известны штаммы Acinetronacter sp. HB-1 (RU 2077579); Acinetronacter sp. JN-2 (RU 2064017), Pseudomonas alcaligenes E7 (RU 2134723), Pseudomonas putida 36 (SU 1076446), пригодные для очистки почвы от нефти, но процесс утилизации резко замедляется при понижении температуры ниже 20°С, что затрудняет их использование в условиях Севера.

Большую эффективность в условиях низких положительных температур показал штамм Rhodococcus erythroplis Е-15 (RU 2019527), но процесс биодеградация нефти протекает медленно и только при добавлении нитроаммофоски или нитроаммофоски и натриевой селитры.

Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам.

Поставленная задача решена тем, что получен штамм Pseudomonas panipatensis С71, обладающий утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам, который может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в широком диапазоне температур (от +8 до +30°С).

Штамм Pseudomonas panipatensis C71 выделен из воды открытого водоема (озеро Халы-Балы, село Чапчылган, Амгинский район, Республика Саха (Якутия)), загрязненного арктическим дизельным топливом, с пробы, отобранной с глубины 10 см, в удалении 1 м от берега.

Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика (ВКПМ) (Москва, 1-й Дорожный пр., д.1) под регистрационным номером ВКПМ В-10593.

Полученный штамм характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Это микроскопическая характеристика (внешний вид под микроскопом). Грамотрицательные подвижные палочки размером 2,0-3,0×0,6-0,8 мкм. Спор и капсул не образуют. В мазках располагаются беспорядочно, одиночно или короткими цепочками (по 2-3).

На питательном агаре (масс.%: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное; рН 7,1-7,5) и на мясопептонном агаре (масс.%: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2) через 24 часа штамм формирует дискообразные, влажные, пастообразной консистенции S - колонии сероватого или грязно-голубоватого цвета диаметром 1,5-5 мм, легко снимающиеся с агара. При температуре выше +20°С штамм образует диффундирующий пигмент зеленого цвета, который при температуре +4°С может теряться и восстанавливаться при температуре от +20°С.

На среде Эндо (масс.%: панкреатический гидролизат рыбной муки - 1,2; экстракт пекарских дрожжей - 0,1; натрий хлористый - 0,34; сульфит натрия - 0,08; натрий фосфорнокислый двух замещенный - 0,05; фуксин основной - 0,02; лактоза - 1,0; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное) при рН 7,4±2 образует круглые с голубым оттенком колонии 0,5-3,0 мм в диаметре, выпуклые, гладкие, с более плотным центром и плоским краем, блестящие, полупрозрачные, со временем приобретающие матовую поверхность.

На среде Сабуро (масс.%: гидролизат рыбной муки - 1,0; панкреатический гидролизат казеина - 1,0; дрожжевой экстракт - 0,2; натрия фосфат однозамещенный - 0,2; D-глюкоза - 4,0; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное; рН 6,0±3) образует круглые с сероватым оттенком колонии 1,0-5,0 мм в диаметре, выпуклые, гладкие, блестящие, непрозрачные, через 24-72 ч приобретающие матовую поверхность и зеленый пигмент.

Штамм растет на минеральной среде Мюнца с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо) следующего состава: (масс.%) KNO₃ - 0,4; MgSO₄·7H₂O - 0,08; NaCl - 0,1; K₂HPO₄ - 0,14; KH₂PO₄ - 0,06; агар - 2,0; нефть или дизельное топливо - 1,0; вода дистиллированная - остальное, рН - 7,2, в виде влажных непрозрачных голубоватых колоний диаметром 1-2 мм.

В мясопептонном бульоне (масс.%: ферментативный пептон - 1,0, натрий хлористый - 0,5, вода мясная - остальное; рН 7,0-7,2) растет в виде диффузного помутнения.

Физиолого-биохимические признаки

Штамм является аэробом. Быстро (в течение 24-72 часов) растет на средах с добавлением гидролизата рыбной муки, при температуре от +8°С до +41°С. Оптимум роста +30°С. Растет при рН 6,0-8,0. Растет в солевой среде с добавлением 0,1-2,0% NaCl. Обладает оксидазной и каталазной активностью. В качестве источника углерода потребляет ацетат и цитрат. Восстанавливает нитраты. Денитрификационная активность отсутствует. Не гидролизует желатин. Обладает уреазной активностью. Не гидролизует крахмал. Лецитиназу не образует. Индолоотрицателен. Окисляет мальтозу и D-глюкозу. Не ферментирует глицерин, инозит, маннит, рамнозу, сорбит, раффинозу, арабинозу. Не окисляет сахарозу, маннит, ксилозу, арабинозу, фруктозу, галактозу. Не нуждается в дополнительных факторах роста.

Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).

Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном мясопептонном агаре или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при 4°С.

Таким образом, заявляемый штамм достаточно быстро утилизирует нефть и дизельное топливо в воде и почве в широком диапазоне температур (от +8 до +30°С).

Формула изобретения

Штамм бактерий Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Изобретение "ШТАММ БАКТЕРИЙ Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ" (Ерофеевская Л.А.) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога