СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Название	СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Разработчик (Авторы)	Коломеец Н.Ю., Косарева П.В., Аверьянова Н.И.
Вид объекта патентного права	Изобретение
Регистрационный номер	2393547
Дата регистрации	10.03.2009
Правообладатель	Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Описание изобретения

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для повышения эффективности лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте путем оптимизации диеты.

Острый гломерулонефрит - острое постинфекционное диффузное пролиферативно-экссудативное заболевание почек, характеризующееся иммунным поражением клубочкового аппарата почек. Для данной патологии, даже в отсутствие почечной недостаточности, типично проявление эндогенной интоксикации в результате тканевой деструкции и гипоксии. По данным литературы (Шулутко Б.И. Нефрология 2002. Современное состояние проблемы.-СПб.: Ренкор. 2002. - 780 с.; Мухин Н.А., Козловский Л.В., Шилов Е.М. Рациональная фармакотерапия в нефрологии: Рук. для практических врачей. Т.13. - М.: Литтера, 2006. - 896 с.; Игнатова М.С., Коровина Н.А. Диагностика и лечение нефропатий у детей.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 336 с.) общие принципы диеты при остром постстрептококковом гломерулонефрите заключаются в ограничении потребления соли и воды в острый период болезни, ограничении потребления белка в случае значительного снижения скорости клубочковой фильтрации и развития олигурии.

В доступной научной и патентной литературе мы не встретили данных о применении в диете при остром постстрептококковом гломерулонефрите в качестве компонента функционального питания комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон.

Изобретение направлено на решение задачи: исследование эффективности комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» в качестве компонента функционального питания при лечении острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте.

Технический результат: повышение эффективности лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте путем оптимизации диеты.

Указанные задачи достигаются путем включения в качестве компонента функционального питания экспериментальным животным (беспородным белым крысам) с острым постстрептококковым гломерулонефритом, одновременно с препаратом амоксиклав в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно в течение 10 дней, комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R» в количестве 10% суточного объема пищи, из расчета 3 г в сутки, предварительно механически измельчая его и смешивая с кормом.

Препарат «Ультрасорб^R» (ТУ 9295-006-05344371-2006; № госрегистрации: 77.99.23.3. У2066.3.06 от 10.03.2006. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека) не является лекарством, выпускается ЗАО «Ягодное», г.Киров, д.Югрино, Россия и используется в качестве дополнительного источника пищевых волокон практически здоровыми людьми при воздействии неблагоприятных экологических и производственных факторов, при повышенном риске формирования дисбактериоза, онкологических заболеваний, сахарного диабета. Также комплекс пищевых волокон «Ультрасорб^R» применяется отдельно или как дополнение при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта (стоматиты, дисбиоз, острые кишечные инфекции, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гастриты, холециститы, гепатиты, энтериты, колиты); нарушении обмена веществ (атеросклероз, ожирение, сахарный диабет, гипергликемия); вторичной иммунной недостаточности; алкогольной интоксикации; воспалительной патологии кожи микробного и аллергического происхождения.

Основной компонент препарата «Ультрасорб^R» - ферментированные нерастворимые и растворимые пищевые волокна. Пищевые волокна относятся к растительным углеводам (полисахаридам), которые не метаболизируются ферментами макроорганизма. Патогенетической основой профилактического и лечебного действия пищевых волокон являются короткоцепочечные жирные кислоты, образующиеся при ферментации пищевых волокон нормальной микрофлорой толстого кишечника, а также «жесткие» структурные компоненты пищевых волокон, обладающие сорбционной способностью. Короткоцепочечные жирные кислоты усиливают экспрессию генов, определяющих синтез ферментов, обеспечивающих защиту клетки от свободнорадикального повреждения; являются регуляторами дифференцировки и апоптоза многочисленных типов клеток; их оптимальный обмен является значимым для поддержания водно-электролитного равновесия и минерального обмена; являются основой энергообеспечения представителей нормофлоры.

Способ осуществляют следующим образом.

Эксперимент выполнен на 40 животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария в соответствии с нормами, утвержденными приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 г. №163 и приказом Минздрава СССР от 10.10.83 №1179 (пункт 4.1). Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. №755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Животные были разделены на 4 экспериментальные группы:

I группа - контрольная (интактные животные), типовой рацион вивария, n=8;

II группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита (забор аутопсийного материала осуществляли у 8 животных на 21 день, у 8 животных - на 31 день эксперимента), типовой рацион вивария, n=16;

III группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом (забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента), типовой рацион вивария, n=8;

IV группа - моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом, типовой рацион вивария с добавлением комплекса пищевых волокон «Ультросорб^R» (забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента), n=8.

Гломерулонефрит у животных моделируют по оригинальной методике, используя многократную иммунизацию убитой нагреванием бульонной культурой нефритогенного штамма пиогенного стрептококка - Dick-I Streptococcus pyogenes (ГНИИ стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича). Штамм пиогенного стрептококка вводят 1 раз в день внутрибрюшинно по схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами.

Экспериментальную терапию начинают на 21 день эксперимента. Терапия амоксиклавом проводится из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней, внутрибрюшинно. На 31 день от начала иммунизации животных выводят из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии.

Для проведения гистологического исследования почки животных фиксируют в 10% нейтральном формалине, подвергают обезвоживанию в спиртах возрастающей крепости, заливают в парафин. Срезы получают на ротационном микротоме, окрашивают гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону, нитратом серебра по Футу. Исследуют микропрепараты в проходящем свете светового микроскопа, объектив 40.

Результаты экспериментов подвергнуты статистической обработке с применением компьютерных программ Microsoft Excel и Biostat.

При морфологическом исследовании почки животных контрольной группы имели бобовидную форму, капсула почки легко снималась, поверхность - светло-коричневая, блестящая, гладкая. На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество - темно-красное. Лоханка не расширена, ее слизистая оболочка гладкая, блестящая.

При проведении гистологического исследования у животных контрольной группы не было выявлено гистологических признаков развития острого нефрита. При проведении гистологического исследования в почках четко выявлялась капсула почки, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество почки. Прямые канальцы в мозговом веществе и собирательные трубочки без особенностей. Визуализировались сосочки и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием. Капсула Боумена имеет толщину (0,321±0,001 мкм), сосудистые клубочки нефрона не изменены. Проксимальные и дистальные почечные канальцы располагались между почечными тельцами, их структура типична.

С целью подтверждения воспроизводимости модели острого постстрептококкового гломерулонефрита забор макропрепаратов у 8 животных осуществляли на 21 день эксперимента. При проведении морфологического исследования почки у иммунизированных животных имели бобовидную форму, увеличены в размерах, набухшие. На разрезе корковое вещество - серовато-коричневого цвета, мозговое вещество - вишнево-красное. Лоханка не изменена.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала, полученного от иммунизированных животных к 21 дню эксперимента, в ткани почек выявлялось полнокровие сосудов коркового и мозгового слоев, большое количество увеличенных гиперцеллюлярных клубочков (около 60%) с резко уменьшенным мочевым пространством, инфильтрированных нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами, с мезангиальной пролиферацией. Отмечалось сужение просветов капилляров за счет пролиферации эндотелиальных и мезангиальных клеток, что выражалось в появлении лапчатых клубочков. Таким образом, в этом сроке отмечалась экссудативная фаза воспаления в клубочках. В проксимальных и дистальных канальцах нефронов имелись участки белковой дистрофии эпителия, воспалительная инфильтрация стромы лимфоцитами с примесью нейтрофилов и гистиоцитов.

При проведении морфологического исследования почек иммунизированных животных на 31 день эксперимента макроскопически наблюдались признаки отека почечной ткани; лоханка не изменена, стенка не утолщена.

При проведении гистологического исследования аутопсийного материала в клубочках (изменения наблюдались в 80% клубочках) начинали преобладать процессы пролиферации, что выражалось в появлении наряду с мезангиальной и эндотелиальной пролиферацией отложения нитей фибрина и белковых масс в капсуле Боумена, сращении капилляров клубочка с капсулой и образовании микрополулуний в отдельных клубочках. Имелся тромбоз капилляров клубочков. Их базальная мембрана была значительно утолщена (2,081±1,216 мкм, p<0,1). В проксимальных и дистальных канальцах отмечалась белковая дистрофия эпителия, в межуточной ткани почек - воспалительная инфильтрация нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами.

У животных 3 группы (моделирование острого постстрептококкового гломерулонефрита, экспериментальная терапия амоксиклавом, типовой рацион вивария) при заборе аутопсийного материала также отмечалось увеличение почек в размерах. Пирамиды были темно-красные, корковое вещество - серовато-коричневого цвета.

При проведении гистологического исследования в тканях почек отмечались расширение клубочковых капилляров и их полнокровие, лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка и перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток, утолщение гломерулярной базальной мембраны. В части клубочков выявлялось значительное утолщение капсулы клубочка (1,617±1,018 мкм, p<0,1), спайки капиллярных петель с капсулой и спайки внутри клубочка. Изменения отмечались в 50% клубочках.

При заборе аутопсийного материала у животных 4 группы, иммунизированных культурой нефритогенного штамма Str.pyogenes, получавших экспериментальную терапию амоксиклавом, типовой рацион вивария с включением в рацион питания комплекса ферментированных и неферментированных пищевых волокон «Ультрасорб^R», почки животных были незначительно увеличены в размерах, почечная капсула, лоханка, ткань почки на разрезе визуально не изменены.

При проведении гистологического исследования большинство клубочков имели нормальную структуру и морфометрические характеристики. В отдельных клубочках (не более 20%) отмечалась пролиферация мезангиальных клеток, наличие спаек и полнокровие капилляров. Толщина капсулы Шумлянского-Боумена составляла в среднем 0,813±1,165 мкм и не имела достоверных отличий от нормы (p>0,1).

Формула изобретения

Способ лечения острого постстрептококкового гломерулонефрита в эксперименте, заключающийся в том, что экспериментальному животному в качестве диеты добавляют в рацион питания препарат «Ультрасорб^R» из расчета 3 г в сутки в течение 10 дней одновременно с препаратом амоксиклав в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно.

Изобретение "СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ" (Коломеец Н.Ю., Косарева П.В., Аверьянова Н.И.) отмечено юбилейной наградой (25 лет Российской Академии Естествознания)
Медаль Альфреда Нобеля

Оформление наградных документов и заказ каталога